羊栖菜多糖的提取分离、生物活性及结构鉴定

摘要

论文主要采用微波辅助处理和优化羊栖菜多糖提取工艺，通过超滤膜技术对羊栖菜多糖进行分离，并对不同分子量段的羊栖菜多糖（SFPS）进行体外抗氧化活性分析，在此基础上选取体外抗氧化活性较高的分子量段多糖进行体内抗疲劳及小鼠水迷宫实验，并对该分子量段多糖进行纯化和结构分析。
　　论文以羊栖菜为原料，微波辅助萃取技术提取羊栖菜多糖，在单因素实验基础上，采用响应面设计方法研究羊栖菜多糖提取的最优工艺条件。微波辅助水提法提取羊栖菜多糖的最佳工艺条件为：液料比34mL/g，微波时间8min，水提温度95℃，提取时间2.1h。此优化条件下，羊栖菜多糖得率为11.51％±0.12%。
　　通过超滤膜技术（分别为10万，5万，1万，5千）将羊栖菜多糖进行分离，并对不同分子量段羊栖菜多糖进行体外抗氧化活性分析，结果表明：不同分子量段羊栖菜多糖均具有较强抗氧化能力，其中对羟自由基、DPPH·自由基清除效果更明显，对超氧阴离子的清除作用相对较弱，自由基清除率均随多糖浓度的增加而增加，呈现量效关系，相对分子量越小其自由基清除能力相对越强。
　　对不同分子量段羊栖菜多糖（SFPSⅤ、SFPSⅣ、粗多糖）进行小鼠学习记忆能力试验，采用120只昆明小鼠（雌雄各半），并随机分为12组：正常对照组、消旋山莨菪碱所致记忆获得性障碍模型组、吡拉西坦（脑复康）阳性对照组和实验组，实验组为不同分子量段羊栖菜多糖高剂量组（0.4 g/kg）、中剂量组（0.3 g/kg）、低剂量组（0.2 g/kg）。连续灌胃15 d，进行Morris水迷宫试验测试各组的学习记忆能力；测试前20 min，除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均注射消旋山莨菪碱，以此建立消旋山莨菪碱记忆获得性障碍模型，测试结束后检测各组血清T-AOC、SOD活性和MDA含量。结果表明：羊栖菜多糖对记忆障碍小鼠学习记忆能力具有一定的改善作用，中剂量
　　SFPSⅤ与模型组相比，小鼠平均逃避潜伏期明显缩短，穿越次数明显增加（P＜0.05）；不同分子量段羊栖菜多糖对小鼠的学习记忆能力改善程度不同，低分子量段多糖效果最佳，且优于脑复康的效果（P＜0.05）；羊栖菜多糖改善消旋山莨菪碱记忆获得性障碍模型小鼠的学习记忆能力，其机制可能与羊栖菜多糖的抗氧化能力有关；研究结果对羊栖菜多糖的利用及活性研究具有一定的指导作用。
　　对不同分子量段羊栖菜多糖（SFPSⅤ、SFPSⅣ、粗多糖）进行小鼠抗疲劳作用试验。采用100只昆明小鼠（雌雄各半），并随机分为10组：正常对照组、不同分子量段羊栖菜多糖高剂量组（0.3 g/kg）、中剂量组（0.2 g/kg）、低剂量组（0.1 g/kg）。连续灌胃15 d后，进行小鼠负重游泳实验，记录小鼠体重、负重游泳力竭时间、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肝糖原、肌乳酸及血清尿素的含量。结果表明，羊栖菜多糖具有抗疲劳作用，羊栖菜多糖抗疲劳活性主要作用组分为低分子量段多糖，这为进一步研究羊栖菜多糖活性机制奠定基础，为羊栖菜多糖抗疲劳保健食品的开发与利用中提供新途径。
　　羊栖菜多糖SFPSⅤ采用阴离子交换柱层析法经不同浓度NaCl梯度洗脱，得到三种电荷性质相同的单一多糖组分0.1M SFPSⅤ、0.3M SFPSⅤ、0.5M SFPSⅤ，经透析脱盐，浓缩后分别过葡聚糖凝胶G-100层析柱进一步洗脱，得到三种电荷性质及分子量含量分布均一多糖纯品0.1M SFPSⅤG-2、0.3M SFPSⅤG-1、0.5M SFPSⅤG-2。通过红外光谱分析，三种纯品均具有多糖特征吸收峰，存在糖环羟基伸缩振动峰，-CH3、-CH2伸缩振动峰，多糖水合振动峰，糖苷键（C-O-C）非对称振动峰（3，6-内醚桥），S=O伸缩振动峰（说明存在硫酸基取代）；通过离子色谱分析，结果表明0.1M SFPSⅤG-2中主要存在葡萄糖组分，0.3M SFPSⅤG-1、0.5M SFPSⅤG-2均存在5种单糖，分别为葡萄糖、岩藻糖、半乳糖、木糖、甘露糖，前者出现两组杂峰，后者出现一组杂峰；通过一维NMR光谱分析，证明SFPSⅤ存在五种单糖，其中0.1M SFPSⅤG-2存在3种α型吡喃糖、2种β吡喃糖，0.3M SFPSⅤG-1、0.5M SFPSⅤG-2均存在1种α型吡喃糖和1种β吡喃糖。

目录

第一章 引 言

1.1羊栖菜简介

1.2国内外研究现状

1.3 研究内容及意义

第二章 不同分子量段羊栖菜多糖提取分离试验

2.1材料与方法

2.2结果与讨论

2.3结论

第三章 羊栖菜多糖体外抗氧化实验方法

3.1材料与方法

3.2结果与讨论

3.3结论

第四章 羊栖菜多糖对消旋山莨菪碱模型小鼠学习记忆的影响

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.3 结论

第五章 羊栖菜多糖对小鼠抗疲劳作用的研究

5.1材料与方法

5.2结果与分析

5.3结论

第六章 羊栖菜多糖的分离纯化及结构鉴定

6.1实验材料

6.2实验方法

6.3结果与分析

6.4结论

第七章 结论

参考文献

致谢