第一部分：预处理对辣椒根尖染色体制片的影响;第二部分：盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因家族的研究

摘要

本研究以辣椒中椒四号为实验材料，用常规压片法制备辣椒根尖细胞染色体标本。研究了短时间温度预处理对辣椒根尖细胞有丝分裂活性的影响并比较了不同的预处理剂以及冰水预处理时间对中期分裂相的影响。结果表明，经28℃非离体升温处理3小时，冰水预处理24小时，可以获得数目较多、分散均匀的辣椒根尖细胞染色体早中期分裂相。 本研究首先将盐藻叶绿体型甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(DvgapA)在原核系统中进行了诱导表达。DvgapA的全长cDNA片段被克隆到原核表达载体pTWIN1中，构建成原核融合表达质粒pTWIN1-DvgapA。经PCR、酶切以及测序等鉴定后，DvgapA在细菌BL21DE3中进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表明，DvgapA在细菌中被成功诱导表达，融合蛋白的大小约为60kD，且在IPTG诱导后4小时表达量最高。 其次，本研究首次鉴定了盐藻DvgapA基因家族的基因组序列。以DvgapA的全长cDNA作为探针，通过斑点杂交和两步PCR鉴定的方法，从盐藻基因组文库中筛选出甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因目的克隆。经PCR和Southern鉴定，共确认10个带有盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的噬菌体阳性克隆。另外，通过PCR系列筛选的方法，从盐藻BAC文库中筛选得到带有甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的BAC阳性克隆一个。这些阳性克隆中的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因片断，经PCR克隆入pMD18-T载体中，并进行了测序分析。结果表明，盐藻叶绿体型甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因以基因家族的形式存在，根据序列的同源性可分为三种类型：第Ⅰ类与第Ⅱ类基因序列的差别体现在内含子微卫星序列的多态性；第Ⅲ类基因在所分析区段与DvgapAeDNA片段序列完全同源，与前两类基因相比，完整缺失了一个内含子。

目录

原创性声明及本论文使用授权说明

第一部分预处理对辣椒根尖染色体制片的影响

文献综述

1.植物细胞染色体制片的方法

2.预处理因素对植物细胞染色体制片的影响

3.其它因素对植物细胞染色体制片的影响

4.辣椒根尖染色体制片的研究意义

实验材料和方法

1.供试材料

2.实验方法

实验结果与分析

1.温度对辣椒根尖细胞有丝分裂活性的影响

2.预处理剂对辣椒根尖细胞早中期染色体形态的影响

3.冰水预处理时间对辣椒根尖细胞染色体早中期分裂相数目的影响

讨论

参考文献

第二部分盐藻甘油醛-3-磷酸脱氯酶基因家族的研究

文献综述

1.盐藻简介

2.盐藻耐盐机制简介

3.甘油醛-3-磷酸脱氢酶的简介

4.甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的分类

5.甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的演化

6.卡尔文循环途径的关键酶及活性调控

7.GAPDH/CP12/PRK蛋白复合体及光诱导调控模型

8.高盐下盐藻的卡尔文循环途径

9.盐藻中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的研究现状

实验材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

实验结果与分析

1.盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶全长cDNA的原核表达

2.盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因家族的研究

讨论

参考文献

硕士期间发表的文章与会议摘要

致谢