人类新基因ARHGAP12的功能研究

摘要

该实验室从人胎脑cDNA文库中分离到一条新的rhlGAP基因,它具有两种剪接形式.生物信息学分析发现它有20个外显子,位于10p12.它的蛋白产物有5个结构域:SH、WW、WW、PH和rhoGAP.命名规则它被命名为ARHGAP12.在生物信息学分析的基础上,我们对该基因进行了以下的实验研究.①表达谱分析.通过PCR和Northern杂交,我们分析了它在正常组织和肿瘤细胞中的表达谱,发现它是广谱表达的;②胞内过表达分析.该基因的编码区被转染入HO8910细胞以观察可能的对宿主细胞在形态和增殖能力上的影响,结果表明它在胞内过表达可刺激宿主细胞的增殖能力;③绿荧光蛋白定位.用该方法我们检测了该基因产物在细胞内的定位,发现细胞在静息状态下它主要分布于细胞质中;④GAP活性分析.为测定该基因的RhoGAP结构域的活性,我们将其原核表达并进行了体外GAP活性分析实验,结果排除了该结构域对RhoA,Racl和Cdc42Hs的GAP活性;⑤体外亲和层析法结合实验.原核表达了该基因的SH3和WW结构域及基因内一段可能为SH3/WW结构域结合位点的序列,并用体外亲和层析法检测它们之间是否相互结合,以验证该基因是否存在自抑制的调控方式,实验结果表明SH3和WW结构域能和该位点不能结合,不存在自抑制调控.这些实验结果初步揭示了ARHGAP12基因的功能,为进一步深入研究提供了有用的信息.

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