β1，4-半乳糖基转移酶1基因调控的研究

摘要

β1,4-半乳糖基转移酶1(beta-1,4 galactosyltransferase;EC 2.4.1.38)(简称β1,4GT1)是最早被克隆的一种糖基转移酶.和其它糖基转移酶相比,β1,4GT1的特别之处在于它既能定位于高尔基体催化Galβ1→4GlcNAC糖苷键形成,参与糖复合物的合成,又能定位于细胞表面,作为一种细胞粘附分子参与细胞与基质之间和细胞与细胞之间的相互作用,而且细胞表面的β1,4GT1作为一种重要的粘附分子,在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中也发挥着重要的作用.由于β1,4GT1在基因的调控区域富含与SP1结合的GC盒,故其被认为是一种管家基因,但对其具体的调控机制始终缺乏深入的研究.近年来的研究表明,β1,4GT1 mRNA的转录受细胞周期的影响,而且我们最近的研究还发现,β1,4GT1与放线菌酮诱导的SMMC-7721肝癌细胞的凋亡有关,这使我们对β1,4GT1在细胞周期、肿瘤转移以及凋亡过程中的转录调控机制产生了浓厚的兴趣.鉴于对于小鼠β1,4GT1的转录调控研究并未发现上述相关的调控元件,而且对人的β1,4GT1的调控研究也急需深入,在此我们采用筛选λ噬菌体Genomic文库和PCR的方法克隆了人β1,4GT1的5'调控区域,将其克隆到Luciferase报导基因的载体中,并构建了β1,4GT1 5'调控区域的一系列缺失突变体,分别研究了β1,4GT1在细胞周期、肿瘤转移以及凋亡过程中的转录调控.PKB/Akt是PI3K信号通路下游的重要的抗凋亡蛋白,Gag-PKB是一种持续激活型PKB/Akt.我们发现,Gag-PKB稳定转染SMMC-7721细胞后,能明显下调由于细胞非贴壁状态悬浮生长所诱发的失巢凋亡的比率,同时Gag-PKB能降低β1,4GT1的启动子活性,并且共转染的Gag-PKB的表达质粒越多,β1,4GT1启动子活性的抑制越明显.提示我们要更多的关注β1,4GT1与凋亡的联系.我们的研究发现,-571~+52bp中几个潜在的NF-κB的结合位点,Gag-PKB可能通过类似的转录因子来抑制β1,4GT1的转录.

目录

第一部分β1，4-半乳糖基转移酶15’调控区域的克隆及其受细胞周期调控的研究

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分β1，4-半乳糖基转移酶1在高、低转移性肺癌细胞中的差异表达及机制研究

前言

材料和方法

结果

1.PGLH7和PGBE1细胞体外侵袭能力和迁移能力的比较

2.PGLH7和PGBE1细胞中B1,4GTmRNA的表达分析

3.GaIT-Luc报道基因在PGLH7和PGBE1细胞中的差异表达

4.Ets家族转录因子EIAF/PEA3在PGLH7和PGBE1细胞中的差异表达

5.EIAF/PEA3真核表达质粒及义质粒的构建

6.EIAF/PEA3稳定转染PGLH7和SMMC-7721细胞

7.EIAF/PGLH7细胞和EIAF/7721细胞中B1,4GTI的表达

8.EIAF/PEA3对B1,4GTI启动子的调控

9.PGLH7细胞和PGBEI细胞基因组DNA中B1,4GTI启动序列的差异分析

讨论

参考文献

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

综述 Ets蛋白质家族的研究进展

1.Ets蛋白质家族成员的两个重要的结构域

2.Ets蛋白质结合的两类反应元件

3.Ets蛋白质与信号传导

4.Ets蛋白质与其他蛋白质的相互作用

5.Ets蛋白质的生物学功能

6.Ets蛋白质与人类肿瘤

7.Ets蛋白质与人类其它疾病

参考文献

附录

致谢

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