重组HDL-抗乙肝病毒药物复合物的制备及其肝靶向作用的研究

摘要

该研究分别采用了DS.50-MnCl<,2>法从人血浆提取获得opoA-I,冷丙酮-MnCl<,2>法从FIV提取获得apoA-I,冷丙酮-等电点法从基因工程毕赤酵母菌表达物提取获得基因工程apoA-I.这些apoA-I经Dot blotting和<'125>I放射法测定均具有与SMMC-7721肝细胞、HepG<,2>2.2.15肝细胞和大鼠肝脏细胞结合的生物活性.同时对阿昔洛韦进行了前药设计合成,利用阿昔洛韦和棕榈酰氯合成阿昔洛韦的前体药物阿昔洛韦棕榈酸酯,收率达68.0﹪.并通过紫外可见扫描光谱、红外吸收光谱、质谱及<'1>H核磁共振谱、<'13>C核磁共振谱、重水交换谱、BB-DEPT谱、<'1>H-<'1>H COSY谱、<'1>H-<'1>H谱、HSQC谱及HMBC谱等确证该化合物为设计前药.应用脱氧胆酸钠法和超声法可制备重组HDL-那西肽复合物和重组HDL-阿昔洛韦棕榈酸酯复合物;其中脱氧胆酸钠法可将复合物粒径调控到约20nm.采用HepG<,2>2.2.15肝细胞模型进行抗乙肝病毒试验.结果显示人源apoA-I与基因工程apoA-I的重组HDL-那西肽复合物对HBsAg和HBeAg抑制率相当.以HBsAg抑制率50﹪为指标,二者的抗病毒能力都是那西肽脂质体的4倍,是游离那西肽的20倍.重组HDL-阿昔洛韦棕榈酸酯复合物的抗乙肝病毒试验结果显示:人源apoA-I与基因工程apoA-I的重组HDL-阿昔洛韦棕榈酸酯复合物对HBsAg和HBeAg抑制率也相当;以HBsAg抑制率20﹪为指标,二者的抗病毒能力都是阿昔洛韦棕榈酸酯脂质体的20倍,是游离阿昔洛韦棕榈酸酯的20倍,是阿昔洛韦脂质体的40倍,是游离阿昔洛韦的200倍.大鼠体内靶向试验显示,相比游离药物在肝脏的含量17.5﹪和血浆的含量53.3﹪,人源apoA-I与基因工程apoA-I药物复合物在肝脏的含量分别达到76.9﹪和71.2﹪,而血浆含量只有8.8﹪和10.2﹪.由此可见,人源apoA-I和基因工程apoA-I的重组HDL-抗乙肝病毒药物复合物都具有肝靶向作用.

目录

摘要

Abstract

前言

第一部分人apoA-I与基因工程apoA-I的分离纯化、鉴定及生物活性测定

引言

1材料试剂和仪器

1.1材料及细胞模型与实验动物

1.2试剂

1.3溶液

1.4主要仪器

2实验方法

3结果与分析

3.1人血浆apoA-I的提取

3.2从血制品废弃组分FⅣ中提取

3.3从基因工程毕赤酵母菌表达发酵液中获取apoA-I

3.4apoA-I生物活性的检测

4讨论

小结

第二部分阿昔洛韦的前体药物阿昔洛韦棕榈酸酯的合成与分析

引言

1试剂与仪器

1.1试剂

1.2仪器

2实验方法

3结果与分析

3.1阿昔洛韦棕榈酸酯合成与纯化

3.2化合物理化性质

3.3化合物的结构表征

3.4HPLC流动相的组成与流速的确定

3.5外标工作曲线的建立

3.6回收率和精密度

3.7不同反应时间反应液中阿昔洛韦棕榈酸脂的含量检测

4讨论

小结

第三部分重组HDL-药物复合物的制备及其体外抗乙肝病毒和体内肝靶向作用

引言

1材料试剂和仪器

1.1细胞模型与实验动物

1.2试剂

1.3溶液

1.4主要仪器

2实验方法

3结果与分析

3.1蛋卵磷脂的提取

3.2重组HDL-那西肽复合物的制备

3.3重组HDL阿昔洛韦棕榈酸酯复合物的制备

3.4那西肽、阿昔洛韦棕榈酸酯及阿昔洛韦脂质体的制备

3.5药物的体外抗乙肝病毒作用试验

3.6体内靶向肝细胞的研究

4讨论

小结

参考文献

结语

综述肝炎病毒、抗病毒药物及肝靶向载药系统的研究进展

1病毒的特点

2肝炎病毒

3乙型肝炎病毒

4抗病毒药物概论

5前药是抗病毒药物研究的有效方向

6肝靶向类前药及肝靶向载药系统

7人脂蛋白及脂蛋白靶向载药系统

8结语

参考文献

致谢

附录

附图

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