NAFLD大鼠肝脏基因表达谱的改变及二甲双胍的干预作用

摘要

非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver diseases,NAFLD)是一种常见的慢性肝病,是引起不明原因转氨酶升高和隐源性肝硬化的主要原因.该实验即探讨了NAFLD发生和发展过程中肝脏基因的动态改变情况,并观察二甲双胍干预对肝脏基因表达的影响,以进一步明确其治疗机制.第一部分芯片技术研究NAFLD大鼠肝脏基因表达谱的动态变化;目的:了解高脂饮食NAFLD大鼠肝脏基因的异常表达情况,着重探讨代谢、炎症和纤维化相关基因的变化.方法:复制NAFLD大鼠模型,在实验第4、8、12、16、24周分批处死大鼠,观察肝脏组织学改变;并取肝组织进行总RNA提取、双链cDNA合成、cRNA转录和纯化,应用含有15,650条基因的大鼠U230A芯片进行检测.结论:高脂饮食NAFLD大鼠肝脏基因随着时间的进展呈动态性改变,相继表现为成脂基因、代谢酶基因,炎症和凋亡相关基因,以及纤维化相关基因的表达上调,导致NAFLD的病理学发生相应的改变.第二部分成脂相关基因在NAFLD大鼠肝脏中的表达;目的:探讨固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP-1c)及其靶基因脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、成脂相关基因adipsin、resistin和瘦素受体(leptin receptor long form,OB-Rb)在高脂饮食NAFLD大鼠肝脏中的表达及其作用,并分析瘦素及其受体与SREBP-1c和肝组织学改变的关系.方法:RT-PCR检测SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin和OB-Rb在肝脏中的表达,ELISA法检测血清瘦素的变化情况.结论:高脂饮食NAFLD大鼠肝脏SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin mRNA的表达升高,提示NAFLD大鼠肝脏可能发生成脂性改变.血清瘦素水平上升,而肝细胞OB-Rb表达下降,提示NAFLD大鼠存在瘦素抵抗,并可能通过诱导成脂基因的表达,加重肝脏的异位脂肪沉积.第三部分二甲双胍对NAFLD大鼠肝脏成脂基因表达的影响;目的:探讨二甲双胍对NAFLD大鼠肝脏成脂基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为3组.正常组6只,模型组和治疗组各12只.治疗组在给予高脂饮食的同时,在实验开始第4周起按250mg/kg/d加入二甲双胍干预,于第24周时处死.观察肝组织学改变,进行基因芯片检测,并观察肝脏SREBP-1c、FAS、adipsin、resistin和OB-Rb mRNA的表达及血清瘦素的变化情况.结论:二甲双胍可减轻肝脂肪变,改善肝脏炎症损伤和纤维化程度,下调成脂相关基因的表达,并改善高瘦素血症和瘦素抵抗.

目录

前 言

第一部分芯片技术研究NAFLD大鼠肝脏中基因表达谱的动态变化

引言

材料

方法

结果

讨论

第二部分成脂相关基因在NAFLD大鼠肝脏中的表达

引言

材料

方法

结果

讨论

第三部分二甲双胍对NAFLD大鼠肝脏成脂基因表达的影响

引言

材料

方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

附录一

综述1肝脏成脂性改变的研究进展

综述2 二甲双胍对NAFLD的治疗作用及其机制

附录二中英文缩略语对照

附录三硕士在读期间发表文章

附录四致谢

论文独创性声明及论文使用授权声明