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【6h】

E-钙粘蛋白N-糖链的功能及其作用机制的研究

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目录

前言

第一部分E-钙粘蛋白N-糖基化位点突变质粒构建及稳定转染细胞株建立

1.材料

2.方法

3.结果

讨论

小结

第二部分E-钙粘蛋白分子潜在糖基化位点上N-糖链的鉴定

1.材料

2.方法

3.结果

讨论

小结

第三部分E-钙粘蛋白N-糖链的缺失对其蛋白稳定性、分布和运输的影响

1.材料

2.方法

3.结果

3.1 Asn-634位点的N-糖链缺失导致E-钙粘蛋白稳定性下降

3.2衣霉素对野生型E-钙粘蛋白稳定转染细胞株蛋白表达的影响

3.3 Asn-634位点糖链缺失引起的E-钙粘蛋白降解途径的研究

3.4 N-糖链的突变影响E-钙粘蛋白在细胞膜表面的分布

3.5 E-钙粘蛋白N-糖链的去除没有引起的ER-stress

3.6 E-钙粘蛋白的N-糖链对培养上清中E-钙粘蛋白含量的影响

讨论

小结

第四部分E-钙粘蛋白N-糖链的突变对细胞增殖的影响及作用机制

材料和方法

结果

讨论

小结

第五部分E-钙粘蛋白N-糖链对细胞侵袭能力的影响

材料和方法

结果

3.1 E-钙粘蛋白N-糖链对细胞侵袭能力的影响

3.2 E-钙粘蛋白N-糖链对细胞铺展能力的影响

3.3 E-钙粘蛋白N-糖链对细胞间聚集能力的影响

3.4 E-钙粘蛋白N-糖链对细胞迁移能力的影响

3.5 E-钙粘蛋白N-糖链对细胞间连接结构的影响

3.6 E-钙粘蛋白N-糖链对细胞与基质间粘附的影响

3.7 E-钙粘蛋白N-糖链变化前后细胞超显微结构的变化

讨论

小结

第六部分E-钙粘蛋白N-糖链对细胞侵袭能力影响分子机制初步探讨

1材料

2方法

3.1 E-钙粘蛋白N-糖链对cadherin-catenin复合物中β-catenin含量的影响

3.2 E-钙粘蛋白N-糖链对β-catenin酪氨酸磷酸化状态的影响

3.3 E-钙粘蛋白N-糖链对P120酪氨酸磷酸化状态的影响

3.4 E-钙粘蛋白N-糖链去除前后,β-catenin和P120在细胞中定位的变化

3.5 E-钙粘蛋白N-糖链对PKB的473位丝氨酸磷酸化状态的影响

3.6 E-钙粘蛋白N-糖链对整合蛋白及相关信号分子FAK和ILK表达的影响

3.7 E-钙粘蛋白N-糖链对MMPs(MMP-1,MMP2和MMP-9)蛋白的影响

讨论

小结

总结

参考文献

博士生期间其它工作

致谢

综述 E-钙粘蛋白与肿瘤侵袭转移的关系研究进展

博士期间发表的论文

论文独创性声明及论文使用授权声明

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摘要

本论文通过N-糖基化位点点突变方法获得各糖链缺失的E-钙粘蛋白表达质粒,转染不表达E-钙粘蛋白的 MDA-MB-435高侵袭性的乳腺癌细胞株,以研究N-糖链对E-钙粘蛋白功能乃至细胞生物学行为的影响。本论文的研究共分六个部分:l)E-钙粘蛋白N-糖基化位点突变体质粒构建及稳定转染细胞株建立。2)E-钙粘蛋白分子潜在糖基化位点上N-糖链的鉴定。3)E-钙粘蛋白N-糖链的缺失对其蛋白稳定性、分布和运输的影响。4)E-钙粘蛋白N-糖链的突变对细胞增殖的影响及作用机制。5)E-钙粘蛋白N-糖链对细胞侵袭能力的影响。6)E-钙粘蛋白N-糖链对细胞侵袭能力影响分子机制的研究。

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