催乳素释放肽在雌鼠动情周期及针刺调整HPOA异常功能中的作用

摘要

目的：本文以具有正常动情周期的雌性大鼠和去卵巢大鼠为模型，观察脑内催乳素释放肽(prolactinreleasingpeptide，PrRP)及其受体GPR10(G-proteincoupledreceptor10)是否参与雌性大鼠动情周期的调节和电针对下丘脑—垂体—卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovarianaxis，HPOA)异常功能的调节，探讨脑内PrRP在动情周期调节中可能的生理作用，拓展对PrRP及其受体的生物学功能的认识，进一步阐明电针作用的神经内分泌机制。方法：(1)成年雌性SD大鼠，随机分为正常组(INT)、正常加电针组(INT+EA)、去卵巢组(OVX)、去卵巢加电针组(OVX+EA)。电针组穴位选用“关元”、“中极”、“子宫”和“三阴交”，于每天上午8：00-10：00给予电针，每天一次，每次30分钟，连续3天；电刺激电流为连续波，频率2Hz，刺激强度为1～2mA，以动物下肢轻微抖动为度。采用免疫组织化学、实时定量PCR、放射免疫分析等方法，观察了大鼠脑内PrRP在延髓和下丘脑相关核团蛋白和mRNA表达的变化。(2)成年的雌性SD大鼠经阴道脱落细胞组织学检查，分为动情间期组(diestrusstage，DI)、动情前期组(proestrusstage，P)、动情期组(estmsstage，E)和动情后期组(metaestrusstage，M)，采用免疫组织化学和RT-PCR观察正常大鼠动情周期不同时相延髓和下丘脑相关核团PrRP及其受体GPR10的免疫阳性细胞和mRNA表达的变化。(3)采用免疫荧光双标结合激光共聚焦、离体脑片孵育和高效液相电化学法和荧光法、放射免疫分析法等，探讨大鼠脑内PrRP参与调节HPOA功能的可能机制。结果：(1)大鼠切除卵巢后，垂体LH出现超常分泌、血中雌二醇水平明显下降，子宫脏器系数下降，子宫形态结构改变。电针处理后，LH的超常分泌受到明显抑制，雌二醇水平有一定程度的升高，子宫脏器系数增加，子宫形态结构趋于正常。而正常组与正常加电针组之间没有明显差异；(2)去卵巢大鼠延髓孤束核和腹外侧网状核PrRP免疫阳性细胞数显著低于正常组，下丘脑终纹床核PrRP免疫阳性纤维平均光密度也降低。电针后，上述指标有不同程度的增加；(3)与正常组相比，去卵巢大鼠的延髓和下丘脑PrRPmRNA的水平明显降低，而去卵巢加电针组的PrRPmRNA水平显著回升；(4)动情前期组延髓孤束核和腹外侧网状核的PrRP免疫阳性细胞数明显减少，下丘脑终纹床核PrRP免疫阳性纤维平均光密度也减少；(5)动情前期组和动情期组的延髓和下丘脑PrRPmRNA的水平明显增高；(6)大鼠脑内PrRP受体—GPR10的表达在动情周期中未见明显变化；(7)在雌性大鼠的下丘脑内侧视前区，观察到PrRP受体——GPR10与GnRH共存于同一细胞中；(8)在去卵巢大鼠的离体下丘脑脑片中，加入不同浓度的PrRP-31可以明显抑制GnRH的超常释放，并呈明显的量效关系；在离体垂体培养的孵育液中，加入不同浓度的PrRP-31对垂体LH的释放无影响；(9)不同剂量的PrRP-31可引起去卵巢大鼠下丘脑脑片孵育的孵育液中，单胺类递质和氨基酸类递质的含量发生改变。结论：(1)脑内PrRP可能参与了电针调整去卵巢大鼠HPOA异常功能的神经内分泌机制，通过抑制下丘脑GnRH的超常释放，使垂体LH的过高分泌降低；(2)脑内PrRP可能通过调节GnRH峰的形成，参与了生理状态下动情周期的调节；(3)脑内PrRP在生理雌激素水平下，可促进GnRH的释放；在低雌激素水平时，可抑制GnRH的超常释放，其作用可能是通过PrRP受体直接介导的；(4)脑内的某些神经递质如单胺类递质和氨基酸类递质也间接地参与了脑内PrRP对GnRH释放的调节。

目录

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英文缩写词表

前言

参考文献

第一部分催乳素释放肽(PrRP)在电针调整去卵巢大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴异常功能中的作用

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

6 参考文献

第二部分催乳素释放肽可能参与了雌性大鼠动情周期的神经内分泌调节

1 材料

2 方法

3. 结果

4 讨论

5 结论

6 参考文献

第三部分催乳素释放肽对下丘脑-垂体-卵巢轴功能调节的机理研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

6.参考文献

总结

附录1

附录2致谢

附录3主要溶液及配制

综述PrRP/GPR10神经内分泌作用的研究进展