β1，4半乳糖基转移酶Ⅰ和Ⅴ在肿瘤和凋亡中的作用研究

摘要

蛋白的糖基化修饰是一个生物体内复杂而又重要的过程，它和肿瘤的发生发展、侵袭和转移等密切相关。蛋白质的糖基化修饰是在内质网-高尔基体内由糖基转移酶参与下完成的。β1,4-半乳糖基转移酶(β1,4-galactosyl transferase)(简称β1，4GT)家族包括β1，4GI、I到β1，4GT Ⅶ共7个成员，能定位于高尔基体催化Galβ1→4G1cNAC糖苷键形成，参与糖复合物的合成。β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ(简称β1，4GT Ⅰ)是最早被克隆的一种糖基转移酶。β1，4GT Ⅰ既能定位于高尔基体催化Galβ1→4G1cNAC糖苷键形成，参与糖复合物的合成；又能定位于细胞表面，作为一种细胞粘附分子参与细胞与基质之间和细胞与细胞之间的相互作用。 我们的研究发现：myr-Akt通过下调β1，4GT Ⅰ的表达从而抑制CHX介导的SMMC-7721细胞的凋亡。而渥曼青霉素和LY294002处理可以增加Spl的转录表达进而促进β1，4GT Ⅰ的表达，从而增强了CHX所介导的SMMC-7721细胞凋亡。另外，我们发现CHX下调Akt蛋白表达从而导致β1，4GT Ⅰ的表达上调来增加SMMC-7721细胞的凋亡。 我们另一个部分的研究结果表明：β1，4GT Ⅰ在肝癌组织和肝癌细胞中高表达。β1，4GT Ⅰ的表达受肝癌相关因素黄曲霉素、佛波酯、乙肝病毒HBX蛋白和p53蛋白调控，并且β1，4GT Ⅰ的表达和肝癌细胞的成瘤能力、侵袭、转移以及侵袭相关的Integrin β1的表达和FAK的磷酸化相关。报告基因和凝胶阻滞试验证实：E2F1调控β1，4GT Ⅰ转录而调节其在肝癌中的生物学功能。 β1，4GI Ⅴ负责合成胶质瘤特征的N-连接型糖链末端GlcNAc β1，6Man的半乳糖基化修饰。国外研究发现，β1，4GT Ⅴ在多种肿瘤细胞中受Spl调控。我们的研究发现，β1，4GT Ⅴ在胶质瘤表达增高并和胶质瘤的分型相关。过表达β1，4GTⅤ可促进胶质瘤细胞和转化星型胶质细胞的侵袭和生存。抑制其表达可促进凋亡、抑制迁移侵袭以及在裸鼠体内的成瘤能力和抑制AKI、的磷酸化活性。另外，其启动子活性可被生长因子EGF、激活型Ras、ERK1、JNK1和激活型AKT激活。鬼臼乙叉甙(VP16)，是植物产物鬼臼毒素的一种半合成派生物，它可以对许多人类新生物产生临床作用，用于小细胞肺癌、恶性淋巴癌、卵巢癌、睾丸肿瘤、胃癌和胶质瘤的治疗。我们发现：抑制β1，4GI、Ⅴ的表达促进VP16诱导的胶质瘤细胞凋亡。过表达β1，4GT Ⅴ抑制VP16诱导的胶质瘤细胞凋亡。VP16可通过抑制Spl的表达下调β1，4GT Ⅴ的表达和转录。从上可见，β1，4GT Ⅴ可促进胶质瘤的发生发展并且可能可作为胶质瘤治疗新的靶向。β1，4GT Ⅴ在胶质瘤组织、细胞高表达并受EGF/Ras/ERK信号通路调控。我们的研究证实：E1AF调控β1，4GT Ⅴ在胶质瘤细胞中的转录和介导EGF/Ras/ERK信号通路对β1，4GT Ⅴ的转录调控。过表达E1AF促进β1，4GT Ⅴ的转录表达和胶质瘤细胞的侵袭。抑制E1AF的表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和EGF促胶质瘤细胞侵袭作用。E1AF调控β1，4GT Ⅴ的转录是通过和Spl相互作用后，共同结合到β1，4GT Ⅴ启动子的Spl结合位点。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分 β1，4-半乳糖基转移酶Ⅰ在肝癌细胞凋亡中的作用

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 E2F1所介导的β1，4-半乳糖基转移酶Ⅰ转录表达上调促进肝癌的发生发展

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 β1，4—半乳糖基转移酶Ⅴ在神经胶质瘤中的转录调控和功能研究

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

E2F1转录因子的研究进展（综述）

研究生期间发表论文及所获奖励

致谢