CD4+iNKT细胞在实验性过敏性鼻炎发病中的作用

摘要

过敏性鼻炎是一种常见病,多发病,在全世界范围来说其发病率为10％～25％,且呈不断上升趋势。尽管过敏性鼻炎不是一种致命的疾病,但是也明显地影响患者的生活质量。在一些国家,甚至成为一个社会问题。过敏性鼻炎的发病机制中传统的“Th1-Th2失衡理论”还有很多现象无法解释,很多证据表明Th1-Th2的反应失衡很可能只不过是过敏性疾病发病的冰山一角。NKT细胞的发现,也许会对过敏性疾病的发病机制有着有着进一步深入的了解。
　　NKT细胞是一类特殊的细胞亚群,它既表达T细胞的表面标志如TCR,CD3等,也表达NK细胞表面的一些特异的分子如,NK1.1(NKR-PIC),CD161,CD16,CD122等。研究者发现,NKT细胞存在不同的分布,NKT细胞可迅速分泌大量具有免疫调节作用的细胞因子,如IL-4,IFN-γ,IL-10和IL-13,调节体内的免疫反应。
　　α-Galcer是一种脂类物质,有研究表明α-Galcer可以刺激NKT细胞增值,产生大量的细胞因子参与免疫调节,因此及它的类似糖脂类物质已经逐渐引起人们的关注,广泛运用肿瘤、感染性疾病及自身免疫疾病的相关研究。但目前为止尚未见NKT和过敏性鼻炎的关系的研究,本实验即来了解在实验性过敏性鼻炎发病过程中NKT细胞浸润情况,以及通过α-Galcer对NKT的影响途径来实现多过敏性鼻炎的影响,以便进一步确认CD4+iNKT细胞在过敏性疾病中所担当的角色。
　　目的:探讨过敏性鼻炎发病过程中CD4+iNKT细胞浸润情况以及α-Galcer所介导的CD4+iNKT细胞调控对过敏性鼻炎发病的影响。
　　方法:将45只C57BL/6小鼠随机分为A:过敏性鼻炎组,B:生理盐水对照组,C:α-Galcer干预组。A组以卵清白蛋白(OVA)致敏建立过敏性鼻炎模型,B组以生理盐水代替卵清白蛋白(OVA)作为空白对照,C组在过敏性鼻炎造模的最后一周,腹腔连续注射α-Galcer进行干预。比较各组小鼠过敏性鼻炎症状评分,鼻粘膜嗜酸性粒细胞(EOS)计数,鼻粘膜组织形态,免疫酶标技术检测各组鼻粘膜CD4+iNKT细胞的浸润,流式细胞技术(Flow Cytometry,FCM)检测鼻腔灌洗液中的CD4+iNKT细胞,RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)检测各组鼻腔灌洗液的Vα14的基因表达,ELISA检测各组血清IgE水平以及鼻腔灌洗液的IL-4和IFN-γ水平。运用SPSS11.5统计学软件进行分析。
　　结果:1.症状评分:A组评分(7.3±1.0),较B组(0.7±0.6)C组(3.9±1.1)明显增高(p＜0.01),B组评分明显低于C组(p＜0.01)。2.嗜酸性粒细胞计数:A组(7.5±1.2)较B组(0.4±0.5)C组(1.53±0.74)明显提高(p＜0.01),C组高于B组(p＜0.05)。3.鼻粘膜组织形态:HE染色见A组纤毛结构大量脱落,组织水肿,小血管增生,粘膜上皮下固有层嗜酸性粒细胞浸润,淋巴细胞浸润;B组C组均无明显嗜酸性粒细胞浸润,纤毛结构完整。4.鼻粘膜CD4+iNKT细胞浸润情况:A组粘膜下有多量的CD4+,NK1.1染色细胞,即CD4+iNKT细胞;B组仅见少量的CD4+细胞。5.鼻腔灌洗液流式细胞分析:CD4+iNKT细胞阳性率A组(72.6％±0.0789)C组(83.7％±0.0515)明显高于BN(0.49％±0.0013)(p＜0.01),C组高于AN(p＜0.05)。6..鼻腔灌注液Vα14mRNA表达:A组和C组均显现特异性条带,B组未见特异性条带显现。积分光密度:A组(0.3343±0.1585)较C组(0.3521±0.1239)无明显统计学差异(p＞0.05)。7.血清总IgE浓度(ng/ml):A组(116.13±10.70)明显高于B组(26.13±4.19:)C组(73.00±4.34)(p＜0.01),C组明显高于B组(p＜0.01)。8.鼻腔灌洗液IL-4浓度(peJma):A组(238.4±22.0)明显高于BN(7.6±1.5)和C组(15.5±1.6)(p＜0.01),C组明显高于B组(p＜0.01)。8.鼻腔灌洗液IFN-γ浓度(pg/ml):A组(31.6±6.9)明显低于B组(132.2±13.2)和C组(162.8±12.3)(p＜0.01),C组高于B组(p＜0.05)。
　　结论:1.应用OVA及C57BL/6鼠建立过敏性鼻炎的动物模型方法简便、经济,模型致敏效果确切,出现典型的变应性炎症表现,显示造模成功。2.过敏鼻炎小鼠鼻腔有大量的CD4+iNKT细胞浸润,其数量远远超过CD4+细胞。3.α-Galcer在刺激CD4+iNKT细胞增值的同时有效地改善了过敏性鼻炎的症状和免疫学指标。