硫化氢对大鼠心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的作用及机制

摘要

目的：研究硫化氢(Hydrogen Sulfide，H2S)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的作用及机制。
　　 方法：①以原代培养新生大鼠心室肌细胞(neonatal rat ventricularcardiomyocytes，NRVCMs)为研究对象，用盐酸去氧肾上腺素(PhenylephrineHydrochloride，PE)和血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)刺激心肌细胞，建立体外心肌细胞肥大模型，观察不同浓度硫氢化钠(Sodim Hydrogen Sulfide，NaHS，H2S的供体)处理细胞后对心肌细胞肥大的作用及机制。实验采用[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成，苏木素-伊红染色(Hematoxylin-EosinStaining，HE)后用Image Measurement软件测定心肌细胞表面积，实时定量PCR法检测肥大心肌细胞胚胎型基因心房钠尿肽(Atrial Natriuretic Peptide，ANP)和脑钠尿肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)的mRNA表达，Western Blot检测细胞ERK1/2的磷酸化表达，荧光探针法和化学发光法检测细胞活性氧类(Reactive Oxygen Species，ROS)的产生。②以原代培养新生大鼠心脏成纤维细胞(Neonatal Rat Cardiac Fibroblasts，NRCFs)为研究对象，用2％或10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)刺激NRCFs，建立NRCFs增殖模型，观察不同浓度NaHS处理后对NRCFs的作用，用BrdU掺入法测定NRCFs增殖。
　　 结果：①本实验中所建立的肥大心肌细胞模型表现为[3H]-亮氨酸掺入显著增加、心肌细胞表面积显著增大及ANP和BNP mRNA表达显著增加；一定浓度范围的NaHS处理细胞显著降低上述除ANP mRNA外的各项指标。②100μM NaHS处理细胞显著降低PE或AngⅡ引起的心肌细胞ROS的产生。④10μM(低浓度)NaHS处理细胞显著促进NRCFs增殖(包括无血清组、2％和10％FBS组)，而较高浓度NaHS(50μM和100μM)处理细胞显著抑制10％FBS诱导的NRCFs增殖。
　　 结论：H2S显著抑制NRVCMs肥大，其机制与降低心肌细胞ROS的产生有关；H2S对NRCFs的增殖具有双相调节作用。