ApoE基因多态性和cav-1基因上游PPC长度多态性与AD、MCI和VD的相关性研究

摘要

痴呆是严重危害老年人健康的常见疾病。随着人口老龄化的进一步发展,由痴呆造成的社会和经济负担会日益沉重。加快对痴呆病理生理机制的研究和药物开发刻不容缓。AD作为痴呆最主要的类型,目前取得的最大进展是对淀粉样蛋白级联反应在AD病理机制中作用的认识,而这来源于AD的3种致病性基因突变的发现。实际上,基因突变导致的AD仅占AD患者的一小部分,目前绝大部分的研究集中在AD的易感基因领域,由此而推及到其他类型的认知损害性疾病,如MCI和VD等。目前ApoEε4是唯一得到一致认同的AD风险基因,但是ε2与AD以及ApoE基因多态性与MCI和VD的相关性有待进一步证实,需要不同地区、不同种族的大样本分子流行病学研究。本研究在中国南方汉族人群中对ApoE基因多态性以及一种新的AD候选基因,即cav-1基因上游PPC的长度多态性与AD、MCI和VD的相关性进行了研究。 第一部分ApoE基因多态性与AD的相关性研究
　　目的:观察ApoE的ε2、ε4等位基因和携带ε2、ε4的基因型与AD及其不同亚型的相关性,并探讨其对AD发病年龄的影响以及在不同年龄段对于AD患病风险的影响。
　　方法:采用酚-氯仿法提取260例AD患者和286例正常对照者的外周血DNA,以扩增抗拒突变系统法检测ApoE基因多态性,在AD和NC组间进行病例对照研究,通过Logistic回归分析平衡混杂因素,观察ApoE基因多态性和AD的关系。
　　结果:在AD、LOAD和EOAD组,ε2等位基因和ε2(+)基因型的分布频率均显著低于相应的对照组(P<0.05);而ε4等位基因和ε4(+)基因型的频率则显著高于对照组(P<0.05)。在AD组,以ε3ε3基因型为参照,经Logistic回归分析平衡其他混杂因素,结果显示ε3ε4(P=0.000,OR=3.104,95％CI=2.031～4.745)和ε4ε4(P=0.000,OR=24.120,95%CI=5.567～104.512)显著增加AD的患病风险。ε4(+)基因型与AD患病呈显著正相关(P=0.000,OR=3.630,95%CI=2.425～5.424),而携带ε2能显著降低AD的患病风险(P=0.046,OR=0.502,95%CI=0.255～0.988)。分层分析发现,ε2(+)基因型的作用仅见于女性和家族史(-)者;而ε4(+)基因型的作用可见于各个亚组。携带ε2或ε4对AD的发病年龄均无显著性影响(P>0.05)。随着ε2拷贝数的增加,AD的患病率逐渐下降,但发病年龄无显著变化(P>0.05);而ε4拷贝数的增加则显著提高了AD的患病率,但对发病年龄也没有显著影响(P>0.05)。在LOAD组,ε2ε3基因型可以降低LOAD的患病风险(P=0.043,OR=0.358,95%CI=0.133～0.966),而ε3ε4(P=0.000,OR=3.727,95%CI=2.101～6.610)和ε4ε4(P=0.000,OR=39.587,95%CI=5.039～311.017)增加LOAD的风险。ε2(+)基因型携带者LOAD的患病风险是ε3ε3携带者的36.4%(P=0.033,OR=0.364,95%CI=0.144～0.920),而携带ε4患LOAD的风险是ε3ε3携带者的4.565倍(P=0.000,OR=4.565,95%CI=2.651～7.861)。分层分析发现,ε2(+)基因型的作用仅见于女性,但在家族史(-)者也存在降低LOAD风险的趋势(P=0.051);ε4(+)基因型在各个亚组均增加LOAD的易感性。携带ε2的LOAD患者的发病年龄在女性亚组高于非携带者,而ε4携带者的发病年龄在女性和家族史(-)亚组明显低于非携带者。ε2拷贝数的增加使LOAD的患病率逐渐下降,发病年龄显著提高。而ε4拷贝数的增加则显著增加了LOAD的患病率,且明显降低了LOAD的发病年龄。在EOAD组,ε3ε4(P=0.004,OR=2.613,95%CI=1.362～5.012)和ε4ε4(P=0.010,OR=15.866,95%CI=1.911～131.735)显著增加EOAD的易感性。ε2(+)基因型与EOAD的患病风险无显著相关性(P=0.458),而ε4携带者患EOAD的风险是ε3ε3携带者的2.912倍(P=0.001,OR=2.912,95%CI=1.565～5.420)。分层分析发现,ε4(+)基因型的作用主要见于女性和家族史(-)者。携带ε2或ε4对EOAD的发病年龄均无显著性影响(P>0.05)。ε4拷贝数的增加则显著提高了EOAD的患病率,但对EOAD的发病年龄没有显著影响(P>0.05)。按年龄进行细化分层发现,ApoEε2和ε4均在66-70岁年龄段对AD的患病风险施加最显著的影响。
　　结论:ApoEε4是AD(包括LOAD和EOAD)的危险因素,能以剂量依赖的方式增加患病风险,并能以剂量依赖的方式降低LOAD的发病年龄。ApoEε2是LOAD而非EOAD的保护性因素,可以提高LOAD的发病年龄。ApoEε2和ε4对AD的影响是年龄依赖性的,并受性别因素的影响。
　　第二部分cav-1基因上游PPC长度多态性与AD的相关性研究
　　目的:观察cav-1基因上游PPC长度多态性在汉族AD患者和正常对照者中的分布情况,以及和AD及其亚型的相关性。
　　方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测257例AD患者和279例正常对照者cav-1基因上游PPC长度多态性,通过Logistic回归分析观察其与AD的相关性。
　　结果:在AD和NC组中共检测到12种不同长度的等位片断,呈近似正态分布。S、L等位片断和携带S、L片段的基因型以及等长基因型均不影响AD的患病风险,也不影响AD的发病年龄。以M/M基因型为参照,经Logistic回归分析发现,M/L基因型可以显著增加LOAD的患病风险(P=0.043,OR=2.196,95%CI=1.025～4.702)。分层分析发现,携带L等位片断使男性患LOAD的风险增加(P=0.007,OR=6.481,95%CI=1.685～24.935),并可以降低非ε4携带者患LOAD的发病年龄(P=0.035)。在EOAD组,携带S等位片断使女性的患病风险增加(P=0.013,OR=5.342,95%CI=1.426～20.004),而等长基因型则增加了男性患EOAD的风险(P=0.038,OR=4.400,95%CI=1.082～17.884)。对LOAD和EOAD组进行比较发现,L(+)基因型在男性LOAD组的分布频率明显高于EOAD组(x2=3.979,P=0.046);而S(+)基因型(x2=5.358,P=0.021)在女性EOAD组的分布频率显著高于LOAD组。按年龄进行细化分层发现,PPC基因型对AD的影响具有年龄依赖性。
　　结论:cav-1基因上游PPC-L等位片断是男性患LOAD的危险因素,而S等位片断是女性患EOAD的危险因素。等长基因型增加男性患EOAD的风险。L(+)基因型可以降低非ε4携带者患LOAD的发病年龄。PPC基因型对AD的影响具有年龄依赖性。LOAD和EOAD在遗传性易感因素方面可能存在差异。
　　第三部分ApoE基因多态性和cav-1基因上游PPC长度多态性与MCI的相关性研究
　　目的:观察cav-1基因上游PPC长度多态性在MCI患者中的分布,以及ApoE基因多态性和PPC长度多态性与MCI的相关性。
　　方法:分别应用扩增抗拒突变系统法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测96例MCI患者和286例正常对照者的ApoE基因多态性和PPC长度多态性,采用病例对照和Logistic回归分析方法观察其与MCI的相关性。
　　结果:ε2在MCI和NC组间无明显差异(P=0.306),而ε4在MCI组的分布显著高于NC组(x2=22.572,P=0.000)。经Logistic回归分析发现,ε3ε4(P=0.041,OR=1.865,95%CI=1.025～3.393)和ε4ε4(P=0.007,OR=10.388,95%CI=1.870～57.705)显著增加MCI的患病风险。Ε4(+)基因型与MCI的患病风险呈显著正相关(P=0.05,OR=2.241,95%CI=1.283～3.914),而携带ε2不影响MCI的患病风险(P=0.614)。分层分析显示,ε4的作用主要体现在女性和家族史(-)者。ApoE基因多态性不影响MCI的发病年龄。与AD组比较发现,ε2(+)基因型在MCI组的分布频率显著增高(x2=6.040,P=0.014);而ε4(+)基因型在两组间无显著性差异(P=0.116)。在非ε4携带者中,MCI组L等位基因和L(+)基因型的分布频率高于NC组,经Logistic回归分析证明,携带L等位片段增加非ε4携带者患MCI的风险(P=0.032,OR=2.410,95%CI=1.080～5.379)。PPC长度多态性不影响MCI的发病年龄,在AD和MCI组间无差异。
　　结论:ApoEε4是MCI的危险因素,但不影响MCI的发病年龄。Ε4的作用受性别影响,在女性作用显著。Ε2在MCI组的分布频率显著低于AD组。Cav-1基因上游PPC-L等位片断是非ε4携带者患MCI的危险因素。
　　第四部分ApoE基因多态性和cav-1基因上游PPC长度多态性与VD的相关性研究
　　目的:观察cav-1基因上游PPC长度多态性在VD患者中的分布,以及ApoE基因多态性和PPC长度多态性与VD的相关性。
　　方法:分别应用扩增抗拒突变系统法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测54例VD患者和60例正常对照者的ApoE基因多态性和PPC长度多态性,采用病例对照和Logistic回归分析方法观察其与VD的相关性。
　　结果:ε2、ε4等位基因和携带ε2、ε4的基因型在VD和NC组间均无显著性差异(P>0.05),而与AD组相比,ε4(+)基因型在AD组的分布频率显著高于VD组(x2=8.884,P=0.003)。PPC长度多态性在VD与NC、VD与AD组间均没有显著性差异(P>0.05)。
　　结论:ApoE基因多态性和PPC长度多态性均不影响VD的患病风险。

目录

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 ApoE基因多态性与AD的相关性研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分 cav-1基因上游PPC长度多态性与AD的相关性研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分 ApoE基因多态性和cav-1基因上游PPC长度多态性与MCI相关性研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第四部分 ApoE基因多态性和cav-1基因上游PPC长度多态性与VD相关性研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

全文小结

创新与不足

综述

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