骨桥蛋白在炎症性肠病发病机制中作用的研究

摘要

第一部分骨桥蛋白在炎症性肠病患者结肠组织中的表达
　　 背景:骨桥蛋白(OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白,在免疫性疾病的发病过程中起重要作用。近年来研究发现炎症性肠病(IBD)患者血浆中OPN水平升高,在患者末端肠和结肠黏膜中发现OPN的表达。
　　 目的:了解OPN在IBD患者中的表达情况,探讨OPN在IBD发病过程中的作用。方法:用免疫组化半定量方法检测OPN在53例溃疡性结肠炎(UC)、62例克罗恩病(CD)和15例结肠腺瘤患者结肠组织中的表达。
　　 结果:OPN在结肠上皮细胞和固有层渗出细胞中均有表达。UC组(11.84±0.98)和CD组(10.04±1.37)结肠上皮细胞中OPN的平均光密度均低于结肠腺瘤组(12.64±1.45),UC组中结肠上皮细胞中OPN的表达高于CD组。UC组(20.31±4.50％)和CD组(12.69±3.06％)结肠固有层渗出细胞中OPN阳性表达率的表达均高于结肠腺瘤组(3.85±0.66％),UC组结肠固有层渗出细胞中OPN的表达高于CD组。
　　 结论:OPN在IBD患者结肠黏膜中表达,来源不同的OPN在IBD中的作用不同。结肠上皮细胞中OPN表达下调可能与肠黏膜屏障受损有关,而在受损结肠渗出细胞中的表达增加则可能与免疫反应有关。
　　 第二部分右旋葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎中骨桥蛋白的变化
　　 背景:OPN在Th1免疫免疫反应早期就有高水平的表达,OPN在IBD患者结肠固有层细胞单核细胞中表达增加。
　　 目的:观察右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎模型中OPN的变化,探讨OPN介导的免疫反应在IBD发病机制中所发挥的作用。
　　 方法:64只雄性BALB/c小鼠随机分为A～H组:对照组(A组和E组)、UC模型组(B组和F组)以及柳氮磺吡啶(SASP)治疗组(C组和G组)和英夫利西治疗组(D组和H组)。A组和E组小鼠分别给予蒸馏水饮用23天和37天。B～D组和F～H组小鼠5％DSS溶液连续饮用9天,产生急性期结肠炎模型,第10天开始以2.5％DSS溶液维持2周;F～H组小鼠第24天开始给予给予蒸馏水饮用2周。B组和F组不给任何治疗;C组和G组小鼠于造模第10天开始给予SASP进行干预治疗,时间分别为2周和4周;D组和H组小鼠于造模第10天开始给予英夫利西单抗进行干预治疗,时间分别为2周和4周。观察指标包括小鼠一般情况、体重和结肠长度变化,行HE(HE)染色以确定结肠病理组织学变化程度。用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血浆中OPN的含量,用免疫组化法检测OPN在结肠组织中定位表达情况,用蛋白质印记法(WB)和逆转录聚合酶联反应法(RT-PCR)分别检测小鼠结肠组织中蛋白质水平和mRNA水平OPN的表达情况。
　　 结果:同对照组小鼠相比,UC模型组小鼠出现明显的结肠炎表现,主要表现为一般情况差、腹泻和便血、体重增长缓慢、结肠长度明显变短以及HE染色病理组织学评分明显升高。SASP和英夫利西单抗治疗后,与UC模型组小鼠相比,一般状况好转,腹泻和便血症状逐渐消失,体重增长,病理组织学评分下降。ELISA、免疫组化半定量、WB和RT-PCR等各种检测均提示,UC模型组小鼠OPN的表达比对照组明显增高,SASP治疗组和英夫利西治疗组OPN的表达均较UC模型组下降,SASP治疗组和英夫利西治疗组OPN的表达无统计学差异。
　　 结论:OPN介导的免疫反应促进了DSS诱导的小鼠结肠炎的发生。经药物治疗后,DSS诱导的小鼠结肠炎炎症程度减轻,OPN的表达降低。
　　 第三部分 OPN和Th1/Th2类细胞因子在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中的变化
　　 背景:OPN是Th1型免疫反应的重要的调节因子。OPN在IBD患者表达增加。IBD患者存在Th1/Th2细胞因子的平衡漂移。
　　 目的:探讨OPN与Th1/Th2细胞因子的表达在IBD发病中的作用。
　　 方法:造模及干预方法同第二部分。分别用ELISA法和RT-PCR法检测DSS诱导的小鼠结肠炎模型治疗前后OPN和各种细胞因子的变化。
　　 结果:OPN检测结果同第二部分。ELISA法检测了小鼠血浆中TNF-α、IL-β、IFN-γ、IL-6和IL-10的浓度。UC模型组小鼠血浆TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6和IL-10水平均较对照组明显增高,SASP和英夫利西干预治疗后TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-6较治疗前降低,其中TNF-α在治疗2周时降低有明显统计学差异,IFN-γ和IL-6在治疗4周时降低有明显统计学差异。而IL-10水平较治疗前升高,尤其是治疗4周时升高有明显统计学差异。RT-PCR检测了小鼠结肠组织中TNF-α、IL-β和IFN-γ表达情况。UC模型组结肠组织中TNF-α、IL-1β和IFN-γ的表达较对照组明显增高,SASP和英夫利西干预治疗后TNF-α、IL-β和IFN-γ表达降低,但无统计学差异。
　　 结论:OPN可促进Th1型细胞因子而抑制Th2型细胞因子的表达,对IBD时Th1/Th2细胞因子的平衡漂移起着重要的调节作用。