保存全血中胞外泛素对输血相关免疫调节影响的初步研究

摘要

目的：全血保存过程中蓄积在血浆中的生物活性分子输入患者体内后调节免疫反应。在引起输血相关免疫调节的生物活性分子中，保存血浆中的游离泛素可能起到很重要的作用，可能作为主要作用物质，也可能协同其它活性分子共同作用。本次实验检测全血储存过程中，血浆中胞外泛素浓度改变在体外实验中对人外周血单个核细胞分泌细胞因子及细胞因子mRNA表达的影响，初步探讨胞外泛素对Th1/Th2细胞分化的影响，分析泛素在输血相关免疫调节中的作用。
　　方法：(1)血库专用白细胞滤器过滤新鲜采集的正常供者全血做为去白细胞全血，未过滤白细胞的全血作为对照。(2)收集不同保存时间的全血血浆，酶联免疫吸附法(ELISA)检测储存过程中全血血浆中的泛素浓度。(3)通过增加外源性泛素以及用泛素抗体封闭35天保存血浆中泛素，观察保存全血血浆中泛素对淋巴细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8和IL-10分泌的影响，各细胞因子用ELISA试剂盒检测。(4)采用荧光定量PCR基因扩增技术，检测炎性细胞因子TNF-α、IL-8mRNA表达水平的改变，同时检测Th1细胞因子IFN-γ，Th1转录调节因子T-bet，Th2细胞因子IL-4，Th2转录调节因子STAT6 mRNA表达水平的改变，进而观察Th1/Th2细胞分化改变
　　结果：随着储存时间延长，35天的去白细胞和未去白细胞全血血浆中泛素浓度升高了146倍和73倍，分别从0天的(18.35±11.87)ng/mL升高到(865.11±83.58)ng/mL，(20.19±10.23) ng/mL升高到(631.01±97.05) ng/mL。35天全血血浆及0天加泛素血浆（泛素浓度等同于35天全血血浆）抑制人类外周血单个核细胞分泌炎性细胞因子TNF-α、IL-2、Th1细胞因子IFN-γ，促进IL-8及Th2细胞因子IL-4分泌。同时，35天去白细胞全血血浆及0天去白细胞加泛素全血血浆（泛素浓度与35天去白细胞全血血浆等同）抑制人外周血单个核细胞TNF-αmRNA及Th1细胞因子IFN-γ和Th1转录调节因子T-bet mRNA的表达;促进IL-8mRNA及Th2细胞因子IL-4和Th2转录调节因子STAT6mRNA的表达。全血血浆对以上细胞因子分泌及mRNA表达的促进或抑制作用可以被泛素抗体解除。
　　结论：储存全血血浆中升高的泛素在输血相关免疫调节机制中发挥重要作用，可引起淋巴细胞因子分泌偏移，Th1/Th2细胞分化偏向Th2方向，Th1细胞分化受抑制，机体细胞免疫功能受抑制，抗肿瘤及抗感染能力下降。储存全血中的胞外泛素是输血相关免疫调节机制发生的重要介质之一。

目录

缩略语

摘要

前言

材料和方法

第一节 保存全血血浆中泛素对人外周血单个核细胞分泌细胞因子的影响

第二节 保存全血血浆中泛素对PBMNC细胞因子mRNA表达水平的影响

第三节 统计学处理

结果

讨论

参考文献

输血相关免疫调节机制研究进展(综述)

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