腺病毒重组血管生成素1对光气引起的大鼠急性肺损伤的保护作用

摘要

研究的背景及目的:
　　光气是一种重要的化学物质被广泛的运用于现代工业。作为一种高毒性的化学制品，可以导致急性肺损伤，肺水肿，甚至于死亡。目前基因治疗已经成为一种新型的治疗急性肺损伤的方法。血管生成素1(Ang1)是拯救内皮及维持内皮稳定性方面的决定性因子，其可能的原理是减少内皮的渗出和削弱内皮的炎症。本课题中，我们观察光气吸入引起的急性肺损伤的病理改变，假设Ang1基因治疗能逐渐降低炎症因子导致的肺血管的渗出。
　　方法:
　　1.选取SPF级雄性SD大鼠（180-220g）60只随机分为6组，光气组暴露于浓度为8.33g/m3光气5min造成急性肺损伤模型，空气组则放入相同体积的容器内，吸入5min空气;设空气对照组三组，分别为:空气组，空气+Ad组，空气+Ad/Ang1组;，光气组三组，分别为:光气组，光气+Ad组，光气+Ad/Ang1组。腺病毒在吸入相应气体后1小时，由尾静脉注射干预。
　　2.气体（空气，光气）暴露5min，36小时后，取右肺下叶行湿/干比检测，取部分右肺上叶石蜡固定，HE染色行病理学检查，部分右肺上叶OCT包埋，新鲜冰冻切片观察免疫荧光，取右肺中叶行Western blot检测肺组中Ang1蛋白含量，RT-PCR法检测肺组中Ang1，IL-1β，IL-17和VEGF mRNA含量。
　　3.左肺行肺泡灌洗，取部分肺泡灌洗液行粒细胞计数。ELISA法检测肺水中Ang1，IL-1β，IL-17和VEGF的浓度。
　　4.腹主动脉采血，离心后取血清，ELISA法检测血清中Ang1，IL-1β，IL-17和VEGF的浓度。
　　结果:
　　1.光气暴露组肺组织内及血清中的Ang1是呈下降趋势的。
　　2.通过腺病毒尾静脉注射法可以成功转染动物，且病毒本身对动物无致病性。
　　3.腺病毒所携带的目的基因可以在动物体内得到表达，肺组织中Ang1蛋白水平， mRNA水平以及血清中Ang1水平均高于空白腺病毒对照组。
　　4.外源性的Ang1可以一定程度上缓解光气引起的急性肺损伤，如减少了肺泡灌洗液中的粒细胞数，肺湿/干比等。
　　5.Ang1可以下调某些炎症因子，如IL-1β，IL-17。
　　结论:
　　1.腺病毒携带Ang1目的基因转染动物模型制造成功，且腺病毒本身对动物无明显影响。
　　2.Ang1肺内高表达，发挥其抗炎和稳定血管减轻渗漏的作用，腺病毒介导的Ang1基因治疗不失为一种可行性的干预光气引起的急性肺损伤的方法。

目录

摘要

引言

缩略词表

第一部分 光气所致的急性肺损伤大鼠体内的血管生成素-1变化的研究

研究背景

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 携带Ang1基因腺病毒对光气引起的急性肺损伤的保护作用

研究背景

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述 骨髓间充质干细胞治疗急性肺损伤机制研究进展

致谢

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