神经元限制性沉默因子对胰岛相关基因调控作用的研究

摘要

神经元限制性沉默因子(Neuronal Restrictive Silencer Factor，NRSF)作为一种转录负调控因子，参与调控神经元特异性基因的表达。最近的研究表明NRSF还参与调控胰岛细胞中神经特异性基因及胰岛相关基因的表达。 本研究拟进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其它NRSF调控基因，进一步揭示NRSF在胰岛发育过程中的作用。根据已有的研究及分析，我们通过筛选和序列比对发现人胰岛素基因核心启动子区及CART基因启动子区分别有一段与NRSE相似的序列，都可能受NRSF调控。对于两种基因我们分别进行了研究。 首先，利用电泳迁移率变动分析实验观察人胰岛素启动子中NRSE样基序与NRSF蛋白的结合情况；同时，我们构建了含NRSF基因的慢病毒载体并包装病毒，获得了稳定表达NRSF的INS-1细胞；构建了含人胰岛素启动子-荧光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒载体及含2拷贝人胰岛素启动子NRSE样基序-荧光素酶(NRSE-LUC)的报告载体，结果表明，稳定转染分析中人胰岛素启动子的活性下降了38.1％，瞬时转染中启动子转录下降了51.5％，这说明NRSF的过表达能明显降低胰岛素启动子的活性；瞬时转染实验也显示NRSF能明显抑制NRSE-LUC的活性，此结构介导的转录活性在NRSF表达组中的转录活性比对照组下降了32.6％。对于CART基因，电泳迁移率变动分析实验证实其NRSE片段可以和NRSF结合；在INS-1中和PC12中，转染NRSF分别使CART启动子的转录活性下降64.6％和42.3％；在INS-1中和PC12中，NRSE基序介导的转录活性也被NRSF抑制，分别比为对照组下降了45.5％和43.2％，这说明CART基因通过此NRSE被NRSF调控；在Hela中干涉NRSF后，启动子转录活性上升为2.41倍，NRSE片段介导转录活性上升为2.45倍； RT-PCR．结果也表明NRSF可阻遏内源性CART基因的转录；组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA的引入使转录活性大幅上升，进一步证实NRSF通过组蛋白去乙酰化作用进行了转录抑制调控。 结论：人胰岛素基因启动子中含有NRSE样序列，该序列通过与NRSF蛋白结合从而抑制人胰岛素启动子的转录活性；CARPT基因启动子区含有的NRSE样序列也具同样的功能。

目录

论文说明：缩略语表

声明

摘要

引言

主要仪器

主要试剂

第一部分NRSF对胰岛素转录调控作用的研究

材料与方法

实验结果

讨论

第二部分NRSF对CART基因转录调控功能的研究

材料与方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

致谢

硕士期间撰写的文章

发表论文一

发表论文二