马钱子生物碱体内代谢及分析方法研究

摘要

含有毒生物碱类的传统中药如马钱子，由于其安全范围较小，容易因治疗剂量不当或者制备方法有误而导致中毒。同时，由于其重要的药用价值，马钱子生物碱一直以来备受科研工作者的重视，研究工作已涉及提取和制备工艺、制剂和疗效、药理和毒理、化学成分、药代动力学、检测技术等诸多方面。但是，鲜见马钱子生物碱体内代谢的研究报道。事实上，马钱子生物碱体内代谢状况的研究意义重大，不仅可以方便中毒案件检查，而且可监测这类药物代谢物在体内的浓度，从而保证使用的安全性和合理性。因此本文将建立可靠的马钱子生物碱体内代谢物定性定量的分析方法。
　　液相色谱-高分辨质(LC-HRMS)是液相分离结合高分辨质谱检测的新型分析仪器。随着高分辨质谱仪由大型装备发展为台式仪器，其近年来的发展也较为迅速，已成为实验室常用设备。借助超高的分辨率，HRMS可以准确可靠地测得化合物的精确质核比，并能区分复杂背景中质量数接近的杂质及共流出组分，具备复杂基质中痕量化合物的分析能力。采用的高分辨全扫描方式也不会遗漏未知化合物如代谢物的信息，是一种可以针对目标或非目标药毒物的筛选方法，在毒物分析领域得到越来越多的应用。
　　本课题以LC-HRMS为技术平台，以马钱子生物碱为对象，对其在生物体内的代谢状况展开研究，具体工作归纳如下:
　　建立了LC-HRMS技术用于马钱子生物碱在大鼠尿液中代谢物确认的方法，选择了固相萃取的方法对样品进行前处理，并采用超高效液相/线性离子肼-静电场轨道阱质谱(UHPLC)/LTQ-Orbitrap MS技术进行分析。共确认26种大鼠尿液中的士的宁代谢产物和23种马钱子碱代谢产物;首次推断出25种体内代谢产物和4条体内代谢途径。本研究不仅更加全面的阐述了大鼠中马钱子生物碱的体内代谢特征，还对毒物筛查和代谢物鉴定领域的工作提供了一定的参考价值。
　　建立了同时检测并定量分析人血中2种马钱子生物碱（马钱子碱和士的宁）及其代谢物的LC-HRMS分析方法，并进行了方法学考察与验证。结果表明该方法符合生物分析的要求。

目录

摘要

前言

第一章 绪论

1 研究背景

2 马钱子生物碱的体内代谢研究现状

3 马钱子生物碱及其代谢物定量方法研究

4 立题依据

参考文献

第二章 基于LC-HRMS的马钱子生物碱大鼠体内代谢研究

引言

1 分析方法的建立

1．1 实验仪器和试剂

1．2 实验方法

1．3 UHPLC-MS分析条件

1．4 数据处理方法

2．分析结果与讨论

2．1 大鼠尿液中马钱子生物碱代谢产物的初步推断

2．2 大鼠尿液中STR代谢产物的初步推断

2．3 大鼠尿液中BRU代谢产物的初步推断

2．4 STR和BRU代谢途径的推断

2．5 分析条件的优化与讨论

3 本章小结

参考文献

第三章 LC-HRMS法测人血中的马钱子生物碱及代谢物

引言

1 分析方法的建立

1．1 实验仪器和试剂

1．2 代谢物对照品的合成及鉴定

1．3 溶液的配制

1．4 血样的预处理

1．5 HPLC-HRMS分析条件

2 基于LC-HRMS的定量方法学验证

2．1 专属性

2．2 标准曲线与线性范围

2．3 灵敏度

2．4 准确度和精密度

2．5 基质效应和提取回收率

2．6 稳定性

3 分析条件的优化与讨论

3．1 色谱条件的选择

3．2 血样前处理条件的优化

3．3 质谱条件的优化

4 LC-HRMS方法的应用

5 本章小结

参考文献

全文总结

课题创新之处

下一步研究设想

附录

缩写字母表

致谢

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