传统酸菜乳酸菌肠溶微胶囊颗粒的制备

摘要

乳酸菌是一种益生菌，对人体有许多重要生理功能，如调节肠道菌群平衡，提高免疫力等。随着生活节奏加快，有关益生菌制剂的研究和产品开发越来越受到人们的关注。目前国内有关乳酸菌制剂的研究和产品多数以国外商品动物性益生菌为主，而且大多数为乳酸菌微胶囊或粉剂的研究。有关从国内传统酸菜或泡菜中分离纯化植物乳杆菌为菌种，研究乳酸菌微胶囊肠溶颗粒的报道甚少。包括益生菌在内各种生物都有地域性和适宜性，中国传统食品中的乳酸菌更适合本土群众。本论文根据目前我国乳酸菌制剂领域存在的问题，从传统酸菜和泡菜中分离植物乳杆菌为菌种，探索可制备乳酸菌肠溶微胶囊颗粒的工艺和制剂的相关特性。
　　研究内容与结果如下：
　　1、乳酸菌的分离和鉴定
　　使用MRS分离培养基，从辣白菜和酸菜中分离出6株乳酸菌。经过革兰氏染色试验、过氧化氢酶试验、明胶液化试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验和糖发酵试验鉴定得到这6株乳酸菌均为植物乳杆菌。
　　2、乳酸菌的筛选
　　（1）产细菌素乳酸菌的筛选：以金黄色葡萄球菌为指示菌进行抑菌试验，筛选出植物乳杆菌S-2菌株，使用游标卡尺测得抑菌圈直径为1.154cm。
　　（2）产γ-氨基丁酸(GABA)乳酸菌的筛选：分别运用薄层层析法和分光光度法分别对上述6株菌产 GABA的能力进行定性和定量分析。实验结果表明，此6株菌中S-2菌产GABA最多，产量为2.013mg/mL。
　　3、扩大培养和离心分离菌体
　　将筛选得到的S-2菌株移至MRS液体培养基，在37℃、100r/min培养，测定生长曲线和pH变化曲线，探究了离心速度和离心时间对乳酸菌活菌数的影响，研究表明，在6000r/min，离心10min条件下所得植物乳杆菌菌泥活菌数多且存活率高，分别为7.93×1010 cfu/g、85.8％。
　　4、菌泥真空冷冻干燥与冻干保护剂
　　采用15%脱脂乳、4%海藻糖、1%维生素C、1.5%谷氨酸钠作为冻干保护剂。在预冻温度-27.3℃，预冻时间2.5h，冻干时间12.5h，真空度10Pa条件下进行真空冷冻干燥，考察了冻干曲线。冻干后，菌体存活率为78.9%，活菌数达2.25×1011 cfu/mL。
　　5、乳酸菌肠溶微胶囊的制备
　　使用成膜性能优良的海藻酸钠和具有肠溶性的羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯（HPMCP）作为壁材，采用传统包衣方法包埋植物乳杆菌，海藻酸钠和HPMCP以不同浓度组合包埋，测定包埋率和存活率，实验得出当海藻酸钠和 HPMCP的浓度都分别为1%的时候，植物乳杆菌的包埋率可达99.52%，存活率达88.36%。
　　6、微胶囊胃肠溶性与贮藏性测定
　　模拟人工胃肠液实验显示，在模拟人体胃环境和肠液中两小时后，微胶囊颗粒活菌比未包埋的冻干菌粉活菌数多4个对数单位。将微胶囊颗粒放置20℃环境下贮藏30d，并与未包埋冻干菌粉作比较，实验显示，未包埋冻干菌粉在30d时已测不到活菌存在，而植物乳杆菌肠溶微胶囊颗粒在30d天后活菌数仍能达到108cfu/mL。

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1 绪论

1.1乳酸菌

1.1.1乳酸菌简介

1.1.2乳酸菌在食品中的应用

1.1.3 乳酸菌的研究进展

1.2微胶囊

1.2.1微胶囊简介

1.2.2微胶囊的制备方法

1.2.3微胶囊的应用现状

1.2.4微胶囊的发展前景

1.3乳酸菌制剂的研究现状

1.3.1乳酸菌制剂的研究现状

1.3.2乳酸菌制剂存在的问题

1.4选题背景和意义

1.5主要研究内容与研究思路

1.5.1主要研究内容

1.5.2技术路线

2 材料与方法

2.1材料

2.1.1 主要试剂

2.1.2主要仪器

2.2乳酸菌的分离鉴定

2.2.1酸菜中乳酸菌的分离

2.2.2乳酸菌的鉴定

2.2.3结果与讨论

2.3乳酸菌的筛选

2.3.1产细菌素乳酸菌的筛选

2.3.2产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选

2.3.3结果与讨论

2.4乳酸菌的生长曲线和pH变化

2.4.1生长曲线与pH变化

2.4.2结果与讨论

2.5乳酸菌冻干粉的制备

2.5.1乳酸菌菌体收集

2.5.2乳酸菌的冻干工艺

2.5.3结果与讨论

2.6乳酸菌肠溶微胶囊颗粒的制备

2.6.1微胶囊壁材的选择

2.6.2乳酸菌肠溶微胶囊包埋率和存活率

2.6.3结果与讨论

2.7乳酸菌肠溶微胶囊颗粒特性研究

2.7.1耐胃酸性和肠溶性

2.7.2肠溶微胶囊颗粒稳定性

2.7.3结果与讨论

3 结论与展望

3.1结论

3.2展望

参考文献

致谢

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