hTERT启动子调控的携带mIFN-γ基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒治疗肝癌的实验研究

摘要

目的:该实验将小鼠的IFN-γ基因隆入hTERT启动子调控的增殖型腺病毒载体中,以ONYX-015作对照,通过体外试验和治疗荷人肝癌裸鼠,对hTERT启动子调控的增殖型腺病毒的抗肿瘤机制作初步探讨,为肝癌病毒—基因治疗和针对端粒酶为靶点的治疗策略提供新的思路.结论:该研究在国际上首次成功构建hTERT启动子调控的携带mIFN-γ基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒.此病毒能在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性增殖,杀灭肿瘤细胞.其携带的mIFN-γ基因能随病毒扩增而大量表达,在肿瘤局部形成高浓度的具有抗肿瘤效应的细胞因子mIFN-γ,协同病毒杀灭肿瘤细胞.在体内、体外其疗效均明显优于ONYX-015,是一种比ONYX-015对肿瘤生长更具有抑制作用的新型增殖病毒.这种方案同时发挥了病毒治疗和基因治疗的优势,我们称之为基因—病毒治疗(gene-viral-therapy),为肿瘤的综合治疗提供了新的方法,也为腺病毒携带治疗基因的肿瘤治疗策略和以端粒酶为靶点的肿瘤治疗策略提供了新的思路.荷肝癌小鼠5次瘤内注射总量1×10<'9>pfu的病毒后有一只小鼠肿瘤完全消退,可能增加注射剂量、延长注射次数能取得更好的疗效,这有待于进一步研究.

目录

缩略词表

前言

材料和方法

一、试剂材料

二、主要仪器

三、细胞株

四、载体构建流程示意

五、引物合成

六、方法

结果

讨论

参考文献

材料和方法

结果

一、病毒增殖实验

二、ONYX-015、VXC70-TP及VXC70-TP-Mγ对MRL-68、BJ、SMMC7721、BEL-7402、Hep3BHepGⅡ细胞株的CPE实验如下图所示

三、细胞活力检测（MTT法）

四、蛋白质印记分析

五、免疫检测mIFN-γ的表达量

讨论

参考文献

第三部分携带mIFN-γ基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒治疗肝癌的体内实验研究

材料和方法

结果

讨论

参考文献

总结

综述端粒、端粒酶与肝癌的研究进展

致谢