巨噬细胞对新生隐球菌活力和基因表达的影响

摘要

研究目的:第一部分:分析巨噬细胞J774.16对新生隐球菌野生株B3501、荚膜突变株Cap60及白化株Mel-的存活力和出芽繁殖能力的影响.第二部分:分析巨噬细胞J774.16对新生隐球菌野生株B3501、荚膜突变株Cap60及白化株Mel-的凋亡和细胞周期的影响.第三部分:研究巨噬细胞对新生隐球菌野生株B3501的基因表达影响.第四部分:研究巨噬细胞对新生隐球菌野生株B3501的主要毒性基因表达影响.结论:第一部分:J774.16细胞对新生隐球菌野生株B3501、荚膜缺陷株Cap60及白化株Mel-均有较强的吞噬能力,其中尤其对白化株Mel-更明显,而对B3501的吞噬指数最低,但其出芽率明显比其它两者高,荚膜和产黑素这两种毒性因子是新生隐球菌在J774.16细胞内存活和生长繁殖不可缺少的条件.巨噬细胞对Cap60和Mel-株的存活力和繁殖能力的影响更大.第二部分:新生隐球菌与巨噬细胞J774.16共孵育后,与野生株相比,巨噬细胞对不同的突变株新生隐球菌的凋亡率影响更明显;其增殖也受到不同程度的抑制,而其中巨噬细胞对新生隐球菌的细胞周期影响以白化株Mel-最为明显.巨噬细胞对不同新生隐球菌的活力有不同的影响.第三部分:巨噬细胞吞噬后,新生隐球菌的细胞增殖和周期变化与ADK1、CYR1表达上调有关;出芽率的下降与ISC10表达下调有关;细胞的活力下降则与离子转运、三羧酸循环中蛋白酶及一些具有ATPase活性的蛋白质基因表达的下降有关;对于新生隐球菌在巨噬细胞内的存活则与这些基因的变化及某些目前尚未确定的功能的基因Hypothetical ORF表达有关,这仍需进一步研究.第四部分:新生隐球菌被巨噬细胞吞噬后,主要的毒性因子基因表达下降,在我们所检测的四个主要毒性因子基因中,肉豆寇酰化转移酶基因最为明显,CNLAC1漆酶基因下降最小,在5倍以上.

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分：巨噬细胞对新生隐球菌出芽的影响及电镜观察

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分：巨噬细胞对新生隐球菌凋亡和细胞周期的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分：采用基因芯片筛选巨噬细胞吞噬前后新生隐球菌基因表达的mRNA水平差异

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分：巨噬细胞对新生隐球菌野生株B3501主要毒性基因表达的影响

引言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

新生隐球菌与巨噬细胞相互作用的研究

致谢