Fas介导的肝癌细胞激活的T淋巴细胞凋亡的双重阻断研究

摘要

该实验包括三个部分:第一部分可溶性Fas阻断T细胞表面Fas L体外制备肝癌特异CTL:通过阻断介导T细胞凋亡,可望建立快速大量激活制备肿瘤特异性CTL方法,并提高抗肿瘤效果.实验结果发现,用肝癌手术切除标本制备肿瘤特异性CTL过程中,应用可溶性Fas双重阻断激活T细胞间诱导T细胞凋亡和表达FasL的肿瘤细胞对免疫细胞反攻击诱导的T细胞凋亡.可望短时间获得大量肿瘤特异的激活T细胞.进一步观察阻断Fas介导T细胞抗肿瘤免疫活性.观察肝细胞表面FasL被封闭后对CTL杀伤敏感性变化,可望为肿瘤免疫治疗研究提供新策略.第二部分体外制备和双重阻断后肝癌特异性CTL体外凋亡作用和细胞杀伤活性变化:流式细胞术仪检测未阻断组较阻断组和静息淋巴细胞组凋亡率明显升高,未阻断组凋亡率达57.33±0.13﹪,静息T淋巴细胞组1.22±0.25﹪,阻断组细胞为13.12±0.26﹪.(P<0.01),DNA ladder显示未阻断组T淋巴细胞出现明显梯状条带,阻断组为阴性.<'51>Cr释放法表明阻断后T淋巴细胞杀伤活性加大,较未阻断组及静息淋巴细胞组差异明显(P<0.01).<'3>H掺入法检测证实可溶性Fas受体阻断激活T细胞凋亡后,细胞增殖明显升高,较未阻断组存在明显差异(P<0.01).体外实验确实获得大量激活T细胞,T细胞可安全有效杀伤肿瘤细胞,这可望为肝癌过继免疫治疗研究提供实验基础和新策略.第三部分可溶性Fas及可溶性Fas阻断后CTL的体内毒性观察:体内研究的结果表明,在SCID小鼠人肝癌模型的实验性治疗中发现,TS-CTLs对小鼠血清AFP水平的下降,腹水形成时间及形成率,生存时间的延长等方面,均显著优于其它方法刺激的T细胞及IL-2,也表明IL-2与TS-CTLs的协同回输可进一步提高疗效.表明TS-CTLs治疗对于肝癌术后抗复发具有良好的应用前景.

目录

缩略词表

Abstract

前言

第一部分可溶性Fas阻断细胞表面FasL体外制备肝癌特异CTL

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分体外制备和双重阻断后肝癌特异性CTL体外凋亡和细胞杀伤活性变化

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分可溶性Fas及可溶性Fas阻断后CTL的体内毒性观察

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

总结

Fas系统介导的细胞凋亡研究进展

淋巴细胞的共刺激作用及其在肿瘤学上的应用

致谢