Ox-LDL诱导单核/内皮细胞共培养系统VEGF上调及其促通透性升高的作用机制研究

摘要

目的:应用人脐静脉内皮细胞/单核细胞共培养模型,检测Ox-LDL对内皮细胞功能的影响,及可能的信号转导途径.方法:用SupurArray公司的GEArrayTM Q系列人内皮细胞生物学功能基因芯片来分析单独培养内皮细胞与共培养系统中内皮细胞在ox-LDL刺激下基因表达的差异,并通过RT-PCR方法对其中部分基因进行验证.采用FC、放免和Western blot法检测KDR的表达,Src、PKC、MAPK及STAT蛋白激酶磷酸化活性及蛋白表达;通过加入各种蛋白激酶抑制剂与VEGF共孵育,检测其对体外培养牛主动脉内皮细胞OxLDL通透性的影响.结果:Ox-LDL可以显著改变共培养系统内皮细胞功能基因的表达.提示单核/内皮细胞共培养系统可以较好的模拟体内生理情况,较真实的反映出Ox-LDL刺激下,内皮细胞功能基因的表达情况及与AS的发生发展的关系.Ox-LDL可以增加内皮细胞VEGFR2/Flk/KDR的高表达,同时可激活Src家族激酶、PKC、ERK1/2和JAK/STAT信号转导途径,使Src、PKC、MAPK及STAT磷酸化活性显著升高,蛋白量表达增加;加入NO合酶抑制剂L-NAME、Src抑制剂PP1、ERK1/2和p38 MAPK的抑制剂PD98059、SB202190和SB203580、Jak-STAT蛋白激酶抑制剂AG490可以抑制VEGF诱导的内皮细胞对Ox-LDL通透性升高.结论:VEGF对内皮细胞Ox-LDL通透性升高作用是通过受体VEGFR2/Flk/KDR/Src酪氨酸激酶/PKC/ERK1/2/JAK-STAT信号转导途径介导的.

目录

英文缩写词表

前言

第一部分Ox-LDL刺激单核/内皮细胞共培养系统对内皮细胞功能的影响

1.1材料与方法

1.2实验结果

1.2.1HUVEC细胞鉴定

1.2.2mRNA浓度测定

1.2.3GEArrayTM Q芯片检测结果

1.2.4 酶联免疫吸附实验（ELISA）测定Ox-LDL对内皮细胞及共培养系统上清VEGF蛋白含量的影响

1.2.5 RT-PCR法验证单层及共培养内皮细胞功能基因mRNA的表达

1.3讨 论

第二部分Src酪氨酸激酶信号转导途径对VEGF诱导内皮细胞Ox-LDL通透性升高的影响

2.1Ox-LDL对内皮细胞VEGF受体(F1t-1和KDR)表达的影响

2.2Ox-LDL对内皮细胞蛋白磷酸化的影响

2.3Src酪氨酸激酶信号转导途径对VEGF诱导牛主动脉内皮细胞Ox-LDL通透性升高的影响

2.4讨论

结 论

参考文献

致 谢

在读期间发表论文

综述Src家族激酶的研究进展

参考文献