表达嵌合T细胞受体的T淋巴细胞介导的肿瘤过继性免疫治疗作用机理研究

摘要

本文构建了anti-erbB2-CD28-ζ嵌合受体分子，通过逆转录病毒载体转染到小鼠T淋巴细胞表面，验证其在体外的肿瘤抗原特异性的杀伤、增殖和细胞因子的分泌功能，以及其在同系小鼠体内的过继性免疫治疗效果并做机理探讨。　　第一部分首先利用基因工程技术，构建携有scFv-anti-erbB2-CD28-ζ嵌合受体的逆转录病毒载体，为检测方便，在单链抗体的VL的C末端克隆入c-myc尾(EIKLISEEDL)。　　第二部分是将嵌合受体表达在小鼠T淋巴细胞的表面，并进行体外功能的检测。　　第三部分是观察表达嵌合受体的T细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用。　　第四部分我们利用共聚焦显微镜观察表达抗erbB2的CARs的T淋巴细胞受相应的抗原刺激后，是否能诱导免疫突触的形成以及人工的CARs是否参与到免疫突触中。　　本实验通过逆转录病毒载体转染CARs到小鼠T淋巴细胞，使之能以MHC非限制性的方式在体内和体外识别并杀伤肿瘤细胞。输入到体内的T-CARs细胞中，CD8+T-CARs细胞的功能主要是直接发挥杀伤肿瘤的作用；CD4+T-CARs细胞则可以通过分泌细胞因子如GM-CSF和IFN-γ来发挥作用。以往研究表明，GM-CSF和IFN-γ有抗肿瘤的作用，IFN-γ还有抗肿瘤血管形成的作用，GM-CSF能促进DC的成熟。最后利用共聚焦显微镜从膜微结构的改变来阐述人工的嵌合受体发挥功能的物质基础，在受到相应抗原刺激后，T细胞形成免疫突触，嵌合受体参与到免疫突触中，现己证明，许多参与T细胞活化的膜表面分子和信号传导分子位于膜筏中，膜筏的重排和聚集被证明是T细胞活化的重要机理。因此，本文认为，表达CARs的T细胞的功能的发挥也是通过形成免疫突触来完成的。

目录

论文说明：缩写词

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前言

第一部分表达嵌合型T细胞受体的逆转录病毒载体的构建及病毒的包装

材料和方法

结果

讨论

第二部分小鼠T淋巴细胞表面嵌合受体的表达及功能检测

材料和方法

结果

讨论

第三部分 表达嵌合受体的T淋巴细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用的研究

材料和方法

结果

讨论

第四部分 人工嵌合T细胞受体功能的发挥有赖于免疫突触的形成

材料与方法

结果

讨论

论文小结

参考文献

综述一基因修饰的T淋巴细胞在过继性的肿瘤免疫治疗中的作用

综述二 CD4+T淋巴细胞在抗肿瘤免疫中的作用

致谢