Bcl-2家族在结直肠癌中的表达及Bcl-XL siRNA诱导结肠癌细胞凋亡的研究

摘要

大量研究表明，肿瘤的发生发展和细胞增殖与凋亡之间的动态平衡受到破坏有关。Bcl-2家族蛋白是重要的细胞凋亡调节因子，它们中有些能抑制细胞凋亡(如Bcl-2、Bcl-XL)，而另外一些则会促进凋亡(如Bax、Bak)，因此它们表达的改变将直接影响着肿瘤细胞凋亡的敏感性。结直肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，最近流行病学资料显示其发病率正呈逐年上升趋势，因此检测Bcl-2家族在结直肠癌中的表达并研究其作用将为结直肠癌的化学治疗和基因治疗提供新的依据。 本课题采用RT-PCR法对40例新鲜结直肠癌手术标本中的癌组织及癌旁组织的Bcl-2、Bcl-XL和Bax进行了mRNA水平检测，结果采用SPSS11.5统计软件处理，癌组织与癌旁组织间表达的比较用Wilcoxon符号秩检验，与临床病理相关因素的关系，采用Kruskal-Wallis检验，结果显示：结直肠癌组织和癌旁组织的Bcl-2mRNA表达水平均较低，大部分标本检测不到或只有很弱的条带，两者之间表达无显著差异；所有标本均能检测到Bcl-XLmRNA表达，且癌组织明显高于癌旁组织(P=0.01)；BaxmRNA表达水平较Bcl-2、Bcl-XL高，但癌组织和癌旁组织间表达无显著差异。癌组织和癌旁组织问Bcl-2/Bax和Bcl-XL/Bax的比值亦无显著差异，而且三个基因在癌组织的mRNA水平均与临床病理相关因素(性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、Dukes分期)无关。同时为了解它们的蛋白水平，本课题采用免疫组化MaxVision二步法检测了上述40例结直肠癌组织和癌旁组织及33例存档结直肠癌蜡块中Bcl-2、Bcl-XL和Bax蛋白的表达情况，后者己获随访资料，免疫组化结果用等级评分法评定，结果癌组织与癌旁组织间表达的比较用Wilcoxon符号秩检验，与临床病理相关因素的关系用χ2检验，生存分析用COX比例风险回归模型，生存曲线用Kaplan-Meier检验。结果如下：73例结直肠癌组织和40例癌旁组织中，Bcl-2蛋白表达较弱，总阳性率分别为50.7％(37/73)、47.5％(19/40)；Bcl-XL蛋白表达较强，总阳性率分别为82.2％(60/73)、70.0％(28/40)；Bax蛋白表达最强，总阳性率分别为87.3％(64/73)、80％(32/40)。只有Bcl-XL蛋白的表达癌组织明显高于癌旁组织，两者之间的差异具有显著性意义(P=0.002)，Bcl-2蛋白的表达与淋巴结转移和Dukes分期成负相关(P=0.037、0.022)，并且是影响总生存时间和无瘤生存时间的危险因素(P=0.011、0.033，RR=2.11、1.935，95％CI1.184-3.762、1.056-3.544)，Bcl-2蛋白表达阴性者生存率低于阳性表达者(P=0.0226)，其他都与临床病理相关因素和预后无关。基于上述结果，为探讨特异性下调Bcl-XL诱导人结肠癌细胞系凋亡的作用，本课题最后采用人结肠癌细胞株DLD1，利用人工合成的Bcl-XL靶向的小分子干扰RNA(siRNA)下调Bcl-XL蛋白，通过Westernblot法检测处理后Bcl-XL蛋白的表达情况，流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡情况，台盼蓝染色法计数存活细胞，结果采用t检验。结果显示：与对照组相比，转染Bcl-XLsiRNA组的Bcl-XL蛋白表达显著性下降，凋亡细胞的数量显著增加(P＜0.05)，细胞存活率显著降低(P＜0.05)。 从上述实验结果得出以下主要结论：(1)在结直肠癌中，Bcl-XL的蛋白和mRNA表达均明显强于Bcl-2，说明Bcl-XL可能起着更为重要的作用，同时可能是潜在的治疗靶点；(2)Bcl-2蛋白表达与淋巴结转移和肿瘤分期负相关，预后随访资料也表明，只有它是影响总生存时间和无瘤生存时间的危险因素，Bcl-2蛋白表达阴性者生存率低于阳性表达者，可以作为临床预后指标；(3)Bcl-XLsiRNA能显著降低人结肠癌细胞的Bcl-XL蛋白表达，凋亡细胞数量显著增加，有效的抑制了细胞生长，为结肠癌的治疗提供了一种新的治疗策略。

目录

文摘

英文文摘

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中英文对照

前言

第一部分结直肠癌组织和癌旁组织中Bcl-2、Bcl-XL和Bax mRNA的表达

第二部分Bcl-2、Bcl-XL和Bax蛋白在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达及其临床意义

第三部分Bcl-XL siRNA诱导结肠癌细胞凋亡的研究

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致谢

附录

Bcl-2家族在恶性肿瘤中的作用