复合乳酸菌对不同营养途径治疗的重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响及其机制研究

摘要

目的:旨在建立适用于研究重症急性胰腺炎(SAP)治疗的大鼠模型；并基于此模型，观察复合乳酸菌对早期肠内营养(EEN)和肠外营养(PN)治疗的SAP大鼠肠屏障功能的影响，深入探讨其作用机制。 方法: 1.构建大鼠SAP模型 92只SD大鼠(体重200±10克)，随机分为假手术组(共20只，分6、12、24和48h4个时间点观察组，每个时间点组为5只)、造模组(共72只，其中20只分6、12、24和48h4个时间点观察组，每个时间点组为5只；加上其余52只，用于观察死亡率)。采用胰腺被膜下均匀注射3.8％牛磺胆酸钠造模，比较对照组和造模组4个时间点血清淀粉酶和胰腺病理的情况，统计造模组死亡率的情况。 2.复合乳酸菌对不同营养途径治疗的SAP大鼠肠屏障功能的影响及其机制研究96只SD大鼠(体重200±10克)，随机分为假手术早期肠内营养治疗组(Sham-EEN)、早期肠内营养治疗组(EEN)、早期肠内营养加复合乳酸菌治疗组(EEN+Lac)；假手术肠外营养治疗组(Sham-PN)、肠外营养治疗组(PN)、肠外营养加复合乳酸菌组(PN+Lac)，每组16只，分别于第4d(8只)和第7d(8只)取材，检测肝和肠系膜淋巴结肠道菌群易位、血浆内毒素、肠转运功能、二胺氧化酶(DAO)、Tunnel法测定小肠上皮细胞凋亡、免疫组化法和实时定量PCR法测定肠上皮紧密结合蛋白Occludin蛋白的表达及mRNA含量、ELISA法测定小肠黏液SIgA含量、BCA法测定小肠粘膜蛋白含量，从多个角度来研究复合乳酸菌对不同营养途径治疗的SAP大鼠肠道功能的影响及其机制。 3.复合乳酸菌对不同营养途径治疗的SAP大鼠细胞因子平衡作用研究方法同第2部分，分别在第4d和第7d取材，采用ELISA方法检测血清促炎因子TNF-α和抗炎因子IL-10的水平，评价IL-10/TNF-α的平衡状态。 4.统计方法资料各组间满足方差齐性的要求，则直接进行单因素方差分析；若不满足，则酌情采用变量变换，对变换后的指标进行单因素方差分析；若方差分析拒绝HO，则使用Scheff法进行各组间的两两比较。采用Pearson相关系数衡量变量间相关程度的大小。细菌易位采用确切概率法。数据采用STATA9.0软件进行统计分析，P＜0.05有统计学意义。 结论: 1.SAP大鼠动物模型的建立：采用胰被膜下均匀注射3.8％牛磺胆酸钠，该方法可成功建立SAP动物模型，重复性好，病情呈渐进性发展，适用于进行SAP的营养治疗研究。 2.复合乳酸菌对不同营养途径治疗的SAP大鼠肠屏障功能的影响及其机制研究 (1)加用复合乳酸菌的EEN可以显著改善SAP大鼠肠屏障功能，减少肠内细菌和内毒素易位的发生。 (2)加用复合乳酸菌的EEN可对SAP大鼠肠屏障功能的保护作用机制可能与促进肠转运功能，增加肠粘膜蛋白的合成，减少上皮细胞的凋亡，增加肠上皮紧密结合蛋白mRNA和蛋白质的表达，增加肠粘膜局部免疫功能有关； (3)加用复合乳酸菌的PN治疗可以改善SAP及长期PN治疗对大鼠肠屏障的损害，机制可能与促进肠转运功能，增加肠粘膜蛋白的合成，减少上皮细胞的凋亡，增加肠上皮紧密结合蛋白mRNA和蛋白质的表达，增加肠粘膜局部免疫功能有关； (4)EEN在维护SAP大鼠肠屏障方面的作用优于PN。 3.复合乳酸菌对不同营养途径治疗的SAP大鼠细胞因子平衡作用研究 (1)加用复合乳酸菌的EEN可以显著改善SAP大鼠细胞因子平衡的状态； (2)加用复合乳酸菌PN可以改善单纯PN治疗的SAP大鼠细胞因子平衡的状态； (3)EEN在促进SAP大鼠细胞因子平衡的状态作用优于PN。

目录

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英文缩略词

前言

第一部分重症急性胰腺炎大鼠动物模型的建立

第二部分复合乳酸菌对不同营养途径治疗的重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响及其机制研究

1材料与方法

2结果

3讨论

4小结

第三部分复合乳酸菌对不同营养途径治疗的SAP大鼠细胞因子平衡作用研究

总结

参考文献

重症急性胰腺炎的生物生态学治疗：肠内营养和益生菌的作用（综述）

致谢

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