液质联用在中药狼毒化学成分研究中的应用

摘要

中药现代化是目前中医药的发展方向，中药的质量控制是中药现代化的一个重要组成部分。由于药材品种繁多，地区用药习惯各异，古代本草记载简单误传错用和用药演变等因素，导致药材同物异名、同名异物以及正品、非正品都入药的混乱现象非常严重。中药作为多组分复杂体系，其所含化学成分众多，影响中药成分的因素也比较复杂，即使是同一药材，其有效化学成分常因生态环境、采集时间、储存和炮制方法等不同而有所差异，这些因素严重影响了中药的质量和用药的安全有效。中药质量控制一直是中药分析的重点和难点，中药指纹图谱是目前国际社会比较认可的中药质量控制的有效手段。但是大多数中药的有效成分复杂，各种成分的药理活性不尽相同，其药效作用的发挥可能是一种或多种化学成分共同作用产生的结果，仅对其中少数已知成分或共有峰进行分析，无法真正体现中药有效成分的物质基础和中药疗效整体性的特点。同一味中药由于其临床应用病症不同，其发挥治疗作用的化学成分也可能不同。因此，中药质量控制应与其临床应用相结合，保证其临床疗效，确保用药安全。 本论文以不同种属狼毒药材为研究对象，结合其临床应用和药理学研究结果，对其中所含的具有生物学活性的化学成分进行分析，为其质量控制研究提供依据。 狼毒又名续毒，川狼毒，为瑞香科植物瑞香狼毒Stellera chamaejasme L.或大戟科植物狼毒大戟 Euphorbia fischeriana Steud，月腺大戟 Euphorbiaebiacteolata Hayata 的根，为一少常用毒性中药。始载于《神农本草经》，其味辛，性平，有毒，入肺、肝、脾经，有逐水祛痰，散结杀虫的功效，主治水肿腹胀，痰、食、虫积、心腹疼痛、咳喘、瘰疬、痰核、疥癣、灭蝇蛆。中国药典1977 版有收载，其后未见收载。近十几年来，民间将狼毒广泛用于抗肿瘤，抗结核及皮肤病的治疗，取得了较好的效果。植化研究表明不同种属狼毒药材中所含的化学成分相差较大，瑞香狼毒根中的主要化学成分有黄酮类、香豆素类、木脂素类、二萜类、甾醇以及氨基酸等，其中瑞香烷型二萜是瑞香狼毒抗肿瘤作用的主要物质基础，黄酮类成分有抗菌，抗病毒的作用。大戟科狼毒药材中主要含有萜类、鞣质、甾醇类等成分，其中松香烷型二萜具有抗癌作用。另外大戟科狼毒药材中狼毒大戟和月腺大戟的化学成分也有所不同。由于狼毒药材来源不同，其中所含的化学成分也不相同，且很多具有一定毒性，用来治疗相同的病症，必然达不到理想的治疗效果，反而有可能带来极大的副作用。 由于狼毒原植物变种较多，各地区狼毒药材的来源比较混乱，伪品较多。目前全国各地所用狼毒的原植物发现约有3科12种(变种、变型)。在四川、云南部分地区用黄花瑞香狼毒(Stellera chamaejasmee f.chrysantha)代替瑞香狼毒入药。天花粉为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim的干燥根，与瑞香狼毒饮片十分相似，常易相互混用，引起中毒；广东地区使用天南星科植物海芋(Alocasiaodora(Roxb.)C.Koch)的干燥根茎代替狼毒使用。针对以上情况，有必要建立一种有效的分析方法用来鉴别狼毒药材的来源，对狼毒药材的质量进行控制。 目前对狼毒药材的质量控制方法主要包括传统的显微鉴别法，薄层色谱法等，也有采用高效液相色谱法测定药材中所含化学成分的含量。这些方法只是对狼毒药材中的一个或几个成分进行了分析，不能够有效的反映不同来源狼毒药材中生物活性成分的多样性及其特征性，有必要建立一个能够用来反映不同种属狼毒药材中化学成分的分析方法，控制药材质量。 本论文以三种不同来源的狼毒药材中所含的主要生物活性成分为研究对象，用正交设计实验优化了其中所含化学成分的前处理条件，确定了狼毒药材中多种成分提取的最佳方法。利用高效液相色谱对瑞香科狼毒中的黄酮类、香豆素类、木脂素类及苯丙烯酚类，大戟科狼毒中的二萜类及乙酰基间苯三酚衍生物等成分进行了分离分析，确定了最佳的液相分离分析条件。同时结合飞行时间质谱对瑞香科狼毒药材中所含的主要生物学成分包括狼毒色原酮及双黄酮类衍生物，瑞香内脂，西瑞香素等，以及大戟科狼毒中的化学成分包括狼毒大戟甲素，严大戟内酯A，严大戟内酯B，月腺大戟乙素，月腺大戟丙素等进行了定性分析。利用离子阱质谱初步探讨了各类主要成分的质谱碎裂规律。确定了瑞香科狼毒药材中的主要特征性成分为双黄酮类及香豆素类成分，狼毒大戟药材中的特征性成分为松香烷型二萜类成分，月腺大戟药材中为乙酰基间苯三酚衍生物及松香烷型二萜类。为狼毒药材不同种属间的鉴别及其质量控制提供了可靠的依据。最后利用高效液相·四极杆质谱联用技术对三种不同来源狼毒药材进行了分析，为液质联用在不同来源狼毒药材鉴别中的实际应用提供了实例。本课题的研究为狼毒药材化学指纹图谱的建立及其质量控制研究提供了依据，为不同种属狼毒药材的临床合理应用提供参考，为狼毒药材中各类化学成分对照品的制备以及生物活性成分的体内代谢研究提供帮助。

目录

声明

摘要

前言

第一部分瑞香狼毒中各类生物活性成分的质谱分析

第一章飞行时间质谱法对各类化学成分的定性分析

1.1.1仪器与试剂

1.1.2液相色谱条件的优化

1.1.3 瑞香狼毒药材前处理条件优化

1.1.4方法学考察

1.1.5质谱条件的确定

1.1.6 瑞香狼毒中化学成分定性分析结果

1.1.7小结

第二章瑞香狼毒中主要生物活性成分的质谱裂解规律研究

1.2.1仪器与试剂

1.2.2方法与结果

1.2.3讨论

1.2.4小结

第二部分大戟科狼毒中各类生物活性成分的质谱分析

第一章飞行时间质谱法对大戟科狼毒中各类化学成分的定性分析

2.1.1仪器与试剂

2.1.2液相色谱条件的优化

2.1.3 大戟科狼毒前处理条件优化

2.1.4方法学考察

2.1.5质谱条件的确定

2.1.6 狼毒大戟中化学成分定性分析结果

2.1.7 月腺大戟中化学成分定性分析结果

2.1.8小结

第二章大戟科狼毒药材中主要生物活性成分的质谱裂解规律研究

2.2.1仪器与试剂

2.2.2方法与结果

2.2.3讨论

2.2.4小结

第三部分单极四极杆质谱在狼毒药材鉴定中的应用

3.1仪器与试剂

3.2方法与结果

3.3讨论

3.4小结

参考文献

致谢