pcDNA 3.1/his-Noggin真核表达载体抑制人骨肉瘤细胞增殖性的实验研究

摘要

目的:测定人正常成骨细胞株和人骨肉瘤细胞株中BMP-2及Noggin的表达水平。构建Noggin真核表达载体并观察转染Noggin载体后的骨肉痛细胞在体内和体外增殖性的影响。 方法:采用RT-PCR方法对人正常成骨细胞株hFOB 1.19和人骨肉痛细胞株MG-63中BMP-2及Noggin的mRNA表达水平进行检测并应用不同剂量的外源性Noggin蛋白,观察Noggin对骨肉瘤细胞增殖性的影响。然后构建Noggin真核表达载体pcDNA 3.1/his-Noggin,并对其进行鉴定。将pcDNA 3.1/his-Noggin转染至MG-63细胞中,应用G418筛选阳性克隆,扩大培养,建立稳转细胞系。在体外对空白组、空载体组及稳定转染pcDNA 3.1/his-Noggin表达载体组的骨肉瘤细胞进行MTT检测转染前后细胞增殖情况的变化,并用流式细胞仪测定细胞周期变化情况。之后将空白组、空载体组及稳定转染pcDNA 3.1/his-Noggin表达载体组的骨肉瘤细胞,分别接种到裸鼠皮下组织内,观察各组肿瘤的生长情况。 结果:与正常人成骨细胞相比,人骨肉瘤细胞MG-63中的BMP-2 mRNA表达水平明显增高。加入外源性Noggin蛋白后,MG-63细胞生长明显抑制,并且具有剂量和时间依赖性。成功构建真核表达载体pcDNA 3.1/his-Noggin,并筛选获得稳转细胞株。体外试验示转染Noggin组的骨肉瘤细胞生长明显受到抑制,分裂期细胞比例降低。裸鼠皮下接种试验示转染Noggin组的骨肉瘤细胞体内致瘤能力下降,肿瘤生长速度、肿瘤终体积和终重量也较空白组和空载体组明显降低。 结论:骨肉瘤细胞和成骨细胞存在BMP-2和Noggin的差异性表达,应用外源性Noggin蛋白及pcDNA 3.1/his-Noggin真核表达载体可以明显抑制骨肉瘤细胞在体内和体外的生长。因此Noggin可以成为治疗人骨肉瘤的可能方法之一。

目录

论文说明：中英文缩略词表

声明

摘要

摘要

前言

第一部分BMP-2/Noggin在人正常成骨细胞和人成骨肉瘤细胞中的差异性表达

摘要

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分pcDNA3.1/his-Noggin真核表达载体的构建和鉴定

摘要

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分pcDNA3.1/his-Noggin真核表达载体抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖性的体外实验

摘要

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分pcDNA3.1/his-Noggin真核表达载体抑制人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤生长的研究

摘要

材料和方法

结果

讨论

参考文献

结论

不足与展望

综述 Noggin与骨肿瘤关系的研究进展

附录 在学期间学术活动情况

致谢