COX-2在兔自体移植静脉增生模型中的表达及对其干预的实验研究

摘要

目的： 冠心病是严重危害人类健康的疾病,随着国人生活和饮食习惯的改变,该病的发病率和死亡率也逐年上升。冠状动脉旁路移植术(CABG)是目前外科治疗冠心病的主要方法,它可以明显改善患者生活质量和延长寿命。乳内动脉和大隐静脉是目前CABG的主要材料,其中大隐静脉的使用最为常见,但术后大隐静脉的远期通畅率并不能令人满意。研究表明应用大隐静脉行CABG后第一年有12-27％的静脉移植物闭塞,5年后其阻塞率为25-31％,以后阻塞率以每年2-4％的速度增长,术后10年有48-66％的静脉移植物完全阻塞,并因此有大约10％的患者需重新手术。因此,如何防治CABG术后移植静脉再狭窄一直是学者研究的热点。 环氧化酶(Cyclooxygenase,COX)又名前列腺素内过氧化物合成酶,是一种膜结合蛋白,具有环氧合酶和过氧化物合成酶双重酶的功能,是体内花生四烯酸转化为前列腺素(prostaglandin,PG)的关键酶。医学上对COX的认识源于对疼痛和炎症的研究,COX是炎症的重要介质前列腺素生物合成的关键酶。人们在研究中发现,COX有两种异构体,即COX-1、COX-2,前者为结构型酶,主要分布于内质网,参与机体正常的生理过程与功能,而后者为诱导型酶,多分布于内质网和核膜,在基础水平表达极低,而在炎症等刺激情况下表达成倍增长。自发现COX抑制剂阿司匹林对动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)相关疾病有防治作用后,COX与炎症反应密切相关的同工酶COX-2成为关注的焦点。多年的研究证实,AS的病理生理过程也是一种慢性炎症反应的过程,其本质为炎症性疾病,系统监测炎症标志物的变化已经成为AS相关疾病现代防治的一大进展。 目前,已有的研究发现了COX-2参与动脉粥样硬化的证据。采用逆转录聚合酶链反应法对人类AS斑块的分子生物学研究发现,AS部位血管的COX-2 mRNA表达是正常血管对照的4.8倍,而COX-1 mRNA表达仅为正常对照的1.1倍。采用免疫组织化学染色发现人类AS病变的各细胞成份均有大量COX-2蛋白表达,而在无AS病变的正常血管壁无表达。同时,有研究发现COX-2不仅参与AS的形成,而且可能在其发生、发展和转归过程中均具有重要影响。而在研究兔动脉球囊扩张损伤的动物实验时发现,损伤动脉平滑肌细胞中的COX-2 mRNA的表达水平明显高于正常对照组,而COX-2选择性抑制剂可抑制它的表达；并且,使用COX-2选择性抑制剂可以减轻实验中血管球囊扩张损伤后的炎症反应及内膜增殖。冠状动脉旁路移植术(CABG)后移植静脉的再狭窄,表现为移植静脉血管内膜及平滑肌的增殖,晚期也表现为粥样硬化。据此,我们假设,COX-2在移植静脉再狭窄模型中会明显表达增高,并且,COX-2的表达与静脉的再狭窄过程相关。据此假设,我们进行本课题的研究。 研究目的有：①以兔为实验动物建立稳定的自体移植静脉模型,证实COX-2在移植静脉中会有明显的表达异常；②原代培养出兔静脉血管内皮及平滑肌细胞,并可连续传代,满足体外实验需要；③建立有效的RNA干扰系统,可在细胞实验中高效特异的抑制兔静脉细胞COX-2的表达；④使用RNAi技术及COX-2特异性抑制剂在细胞实验中检测COX-2的表达情况与兔静脉血管内皮及平滑肌细胞的增殖过程的相关性；⑤通过使用COX-2特异性抑制剂,在动物实验中证实干预COX-2的表达可以影响移植静脉增生、狭窄的进程。 方法： 1、研究COX-2在兔自体移植静脉血管壁中的表达情况 取新西兰大白兔(体重2.2～2.5kg)24只,雌雄不限,随机分成3组,每组8只。耳缘静脉注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉后,以

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论文说明：主要英文缩写

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摘要

前 言

第一部分COX-2在兔自体移植静脉血管壁中的表达情况

材 料

方 法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分兔静脉内皮、平滑肌细胞的培养及鉴定

材 料

方 法

结 果

讨 论

参考文献

第三部分体外抑制COX-2的表达对培养的兔静脉内皮、平滑肌细胞生长的影响

材 料

方 法

结 果

讨 论

参考文献

第四部分COX-2抑制剂对兔自体移植静脉血管壁增殖的影响

材 料

方 法

结 果

讨 论

参考文献

全文总结

综述 环氧化酶2与血管生成及重构的关系

致 谢