NGX6蛋白在鼻咽癌中的表达及其与VEGF表达和LMVD的相关性研究

摘要

第一部分鼻咽癌中NGX6蛋白的表达及其意义 目的：研究鼻咽癌中鼻咽癌相关基因6(nasopharyngeal carcinoma associatedgene6，NGX6)在蛋白水平的表达，及其与年龄、性别、淋巴结转移以及T、N和临床分期等因素的关系。 方法：实验一采用EnVision二步法(Enhance Labelled Polymer System，ELPS法)进行免疫组化染色，检测20例鼻咽部非肿瘤性上皮组织(A组)、32例不伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(B组)及48例伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(C组)中NGX6蛋白的表达情况；结合患者年龄、性别、淋巴结转移、T、N分期和临床分期等多个因素，分析NGX6蛋白表达在鼻咽癌发生及发展进程中的意义。 实验二采用Western Blot法，检测4例鼻咽部非肿瘤性上皮组织(A组)、6例不伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(B组)及10例伴颈部淋巴结转移的鼻咽癌组织(C组)中NGX6蛋白的表达情况；分析NGX6蛋白表达与鼻咽癌淋巴结转移的关系。 结果：实验一中NGX6蛋白的免疫阳性产物为棕黄色颗粒，定位于鼻咽部上皮细胞和肿瘤细胞的细胞膜和细胞浆内。A、B、C三组中NGX6蛋白阳性表达率呈逐级下降趋势。非鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率为85％(17/20)，明显高于鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率52.5％(42/80)，差异有统计学意义(x2=6.9864，P＜0.01)；非转移鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率为68.75％(22/32)，明显高于转移鼻咽癌组的NGX6蛋白阳性表达率41.67％(20/48)，差异有统计学意义(x2=5.6475，P＜0.025)。 实验一鼻咽癌组织中T2期和T3/4期的NGX6蛋白阳性表达率(45.24％、18.18％)均较T1期(77.78％)明显降低(P＜0.01，P＜0.005)；但是T2期和T3/4期鼻咽癌的NGX6蛋白阳性表达率无显著性差异(P＞0.05)。N2/3期的NGX6蛋白阳性表达率(26.92％)较N0和N1期的NGX6蛋白阳性表达率(68.75％、59.09％)均明显降低(P＜0.005，P＜0.025)；但是N0期和N1期鼻咽癌的NGX6蛋白阳性表达率无显著性差异(P＞0.05)。Ⅲ/Ⅳ期的NGX6蛋白阳性表达率(36.37％)较Ⅰ/Ⅱ期(72.22％)明显降低(P＜0.005)。此外，鼻咽癌中NGX6蛋白阳性表达率在不同性别及年龄间无显著差异(P＞0.05)。 实验二A、B、C三组中NGX6蛋白的相对积分光密度值呈逐级下降趋势，三组间差异有显著性(F=38.02，Pr＜0.0001)；非鼻咽癌组的NGX6蛋白的相对积分光密度值(0.9098±0.2673)高于非转移鼻咽癌组(0.3218±0.2003)(P＜0.05)，而非转移鼻咽癌组的NGX6蛋白的相对积分光密度值(0.3218±0.2003)高于转移鼻咽癌组的NGX6蛋白的相对积分光密度值(0.0875±0.0432)(P＜0.05)。 结论：鼻咽癌中NGX6在蛋白水平存在表达下调，并且其下调程度与淋巴结转移相关，鼻咽癌中NGX6蛋白表达越低，预示着淋巴结转移的发生率越高；鼻咽癌中NGX6蛋白的表达与淋巴结转移、T分期、N分期及临床分期均显著相关，但是与患者年龄和性别无关。因此，NGX6蛋白的检测有可能有助于鼻咽癌淋巴结转移风险的预测，并有利于预后的判断。 第二部分 NGX6蛋白表达与LMVD的关系 目的：研究鼻咽组织中NGX6蛋白表达与微淋巴管密度(lymphatic microvesseldensity，LMVD)的相关性，探讨NGX6对肿瘤淋巴管生成可能存在的调节作用。 方法：材料来源同第一部分实验一。采用EnVision二步法进行D2-40的免疫组化染色，计算各样本的淋巴管密度；分析LMVD与NGX6蛋白表达的相关性。 结果：D2-40免疫阳性产物为棕黄色颗粒，定位于淋巴管内皮细胞的细胞浆中。A、B、C三组的LMVD值呈逐级上升趋势，非鼻咽癌组的LMVD值(3.45±1.94)低于非转移鼻咽癌组(6.02±2.96)，非转移鼻咽癌组的LMVD值低于转移鼻咽癌组(10.99±5.10)，三组间差异有显著性(F=29.98，Pr＜0.0001)。NGX6蛋白表达与LMVD值存在明显的负相关(rs=-0.73221，P＜0.0001)，NGX6蛋白表达水平越高，LMVD值越小。 结论：鼻咽癌中LMVD增高，并且其增高程度与淋巴结转移相关，鼻咽癌中LMVD越高，预示着淋巴结转移的发生率越高；鼻咽癌中LMVD与NGX6蛋白表达呈显著负相关，提示NGX6的表达缺失和高LMVD在鼻咽癌的发展中起协同作用，且NGX6可能具有抑制肿瘤淋巴管生成的作用。 第三部分 NGX6蛋白表达与VEGF蛋白表达的关系 目的：研究鼻咽组织中NGX6蛋白与血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)表达的相关性，探讨NGX6对鼻咽癌细胞中VEGF蛋白表达可能存在的调节作用。 方法：实验一材料来源同第一部分实验一。采用EnVision二步法进行免疫组化染色，检测并分析各组鼻咽组织中VEGF蛋白的表达情况；分析VEGF蛋白表达与LMVD的相关性；分析VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达的相关性。 实验二材料来源同第一部分实验二。采用Western Blot法，检测并分析各组鼻咽组织中VEGF蛋白的表达情况；分析VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达的相关性。 结果：实验一中VEGF蛋白免疫阳性产物为棕黄色颗粒，定位于鼻咽部上皮细胞和肿瘤细胞的细胞浆内。A、B、C三组中VEGF蛋白阳性表达率呈逐级上升趋势。非 非鼻咽癌组的VEGF蛋白阳性表达率为55％(11/20)，明显低于鼻咽癌组的阳性表达率86.25％(69/80)，差异有统计学意义(x2=9.7656，P＜0.005)；非转移鼻咽癌组的VEGF蛋白阳性表达率为78.13％(25/32)，明显低于转移鼻咽癌组的阳性表达率91.67％(44/48)，但是差异无统计学意义(x2=2.9688，P＞0.05)。VEGF蛋白表达与LMVD值存在明显的正相关(rs=0.73332，P＜0.0001)，VEGF蛋白表达水平越高，LMVD值越大。VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达呈显著负相关(rs=-0.59988，P＜0.0001)，NGX6蛋白表达水平越低，VEGF蛋白表达水平越高。 实验二中A、B、C三组中VEGF蛋白的相对积分光密度值呈逐级增加趋势，三组间差异有显著性(F=20.13，Pr＜0.0001)；非鼻咽癌组的VEGF蛋白的相对积分光密度值(0.5419±0.1993)低于非转移鼻咽癌组的相对积分光密度值(1.3748±0.3665)(P＜0.05)，非转移鼻咽癌组的VEGF蛋白的相对积分光密度值(1.3748±0.3665)低于转移鼻咽癌组的相对积分光密度值(1.9939±0.4506)(P＜0.05)。VEGF蛋白与NGX6蛋白的相对积分光密度值呈显著负相关(rs=-0.80902，P＜0.0001)，随着NGX6蛋白相对积分光密度值越低，VEGF蛋白相对积分光密度值越高。 结论：鼻咽癌中存在VEGF蛋白过度表达，并且其表达程度与淋巴结转移相关，鼻咽癌中VEGF蛋白表达越高，预示着淋巴结转移的发生率越高；鼻咽癌中VEGF蛋白表达与NGX6蛋白表达呈负相关，提示NGX6的表达缺失和VEGF的高表达在鼻咽癌的发展中起协同作用，VEGF表达可能受抑癌基因NGX6的负调控；鼻咽癌中LMVD值与VEGF蛋白表达呈正相关，进一步验证了VEGF对肿瘤淋巴管生成的促进作用。因此，联合检测NGX6蛋白、VEGF蛋白和LMVD可能更加有助于鼻咽癌淋巴结转移风险的预测，以及预后的判断。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一部分鼻咽癌中NGX6蛋白的表达及其意义

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、结论

第二部分NGX6蛋白表达与LMVD的关系

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、结论

第三部分NGX6蛋白表达与VEGF蛋白表达的关系

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、结论

全文总结

参考文献

文献综述：抑癌基因NGX6与鼻咽癌

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