新生隐球菌荚膜多糖血清型D的合成研究

摘要

近年来，随着癌症放疗、化疗和器官移植及介入治疗患者人数的增加，临床上广谱抗生素、皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用，以及艾滋病的迅速蔓延，使临床深部真菌感染病例急剧增加，全球范围内的真菌感染发病率呈逐年上升的趋势，其中新生隐球菌就是常见的一种致病菌。新生隐球菌感染是由隐球菌属中的新生变种、格特变种和上海变种等引起的一种深部真菌感染。新生隐球菌与其它真菌一样，具有细胞壁和细胞膜。研究发现新生隐球菌的细胞壁外的荚膜多糖与新生隐球菌的毒性和感染力是密切相关的，荚膜多糖有两种类型，其中含量最多的是葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖(glucuronoxylomannan，GXM)。甘露糖三聚体构成GXM的基本重复单位（分子量为百万），这种骨架上的甘露糖可以被葡萄糖醛酸和不同量的木糖取代，D型血清型的木糖与甘露糖的比值为1∶3，而C型血清型的比值为4∶3。GXM上的一小部分糖残基可以被乙酰化，替代物量不同在抗原性方面有重要的意义。GXM的抗原特性已经成为抗新生隐球菌感染疫苗研究的重要连接片段。与纯化的荚膜多糖对照，多糖-蛋白复合物具有较高的免疫原性，免疫接种后可以重复诱导出高滴度的血清。
　　 糖分子是有机体的重要组成部分，主要以糖蛋白和糖脂的形式存在于细胞表面，它不仅是有机体重要的能源和碳源，而且有广泛的生物学功能，在细胞的识别、粘附、吞噬、信息传递等方面也发挥重要作用。
　　 本课题我们设计合成了新生隐球菌荚膜多糖血清型D及部分糖肽化合物，我们以葡萄糖、木糖、甘露糖为起始原料，经过合理保护基的选择，选择适当的路线首先合成了供体Ⅰ，Ⅱ，受体Ⅰ，Ⅱ;然后通过糖基化反应得到两个关键二糖中间体16，18，将其转化成相应的供体17和受体19后，两者进行糖连结得到四糖20，脱除端位对甲氧基苯基保护做成三氯亚胺活化酯21，再将其与受体Ⅱ糖基化反应得到五糖分子。分别将具有一定免疫原性的糖基片断与新生隐球菌生长、感染、侵入、粘附、吞噬、生物膜生成和毒性密切相关的蛋白片段相连。糖肽的连接方式采用了天然的GPI-CWPs的连接，即以乙醇胺作为连接基团。目标化合物及其部分中间体的结构经过了ESI-MS，1HNMR,13CNMR和HR-QTOF-MS确证。对所得的糖肽复合物皮下注射小鼠体内进行免疫活性测试，结合酶联免疫吸附剂测定(ELISA)实验来系统评价糖肽真菌疫苗的免疫活性及其各组成部分对疫苗活性的影响。本课题对抗新生隐球菌感染疫苗的研究和新药开发具有一定意义。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 研究背景

一、新生隐球菌感染的现状

二、新生隐球菌感染的临床表现

三、新生隐球菌免疫学研究

四、新生隐球菌感染的治疗

五、糖肽类药物研究进展(糖缀合物)

第二章 课题设计思想和化合物反合成分析

一、设计思想

二、反合成分析

第三章 实验部分

第一部分 化学实验部分

一、仪器和试剂

二、化学合成方法

第二部分 免疫实验部分

药理试验

第四章 实验结果与讨论

第五章 小结

参考文献

新生隐球菌荚膜多糖合成研究

在读期间发表论文与科研工作情况说明

致谢

附录