地塞米松抗晕动病作用机制及应用研究

摘要

研究背景:
　　 晕动病是指由自身运动或感受到环境运动而产生的一种不适感，常表现为面色惨白、冷汗及出现恶心呕吐反应等。地塞米松是一种合成性类固醇类药物，广泛应用于应对化疗和手术引发的恶心呕吐反应，且疗效明显。1986年，KOHL等人发现地塞米松具有调节晕动病的作用，且由于作用时间长、不易耐受及无嗜睡、记忆力受损、注意力不集中等中枢抑制作用，而优于东莨菪碱联合安非他明预防晕动病，但地塞米松抗呕吐的机制尚不明确。
　　 在抛物线飞行实验中发现，晕动病发生时会出现明显的外周内源性大麻素系统反应降低的表现;本教研室的研究发现，在对加速度暴露后恶心呕吐者和无恶心呕吐反应者的代谢物质研究中发现，恶心呕吐者体内花生四烯酸出现了明显的升高，而花生四烯酸是内源性大麻素的下游代谢产物，这些研究结果提示内源性大麻素系统与晕动病的神经生物发生机制有关。而糖皮质激素与内源性大麻素系统之间具有相互调节的作用。并且，研究者通过动物实验发现，内源性和外源性大麻素可以作用于大麻素CB1受体，通过外周和中枢机制发挥抗呕吐的作用。
　　 在动物实验中我们发现，单独使用醋酸地塞米松对抗大鼠晕动病，虽然效果明显，但具有明显降低大鼠体重的不良反应，本教研室通过前期研究发现醋酸地塞米松联合人参皂苷具有抗晕动病的作用，且不影响大鼠体增重。人们通过研究发现，人参皂苷Rg1是糖皮质激素受体的功能性配体，具有糖皮质激素样作用，还可增强大鼠学习记忆的能力;而人参皂苷Re可以明显减少化疗药物顺铂，造成大鼠高岭土的摄入量，提示其具有抗化疗药物造成的恶心呕吐反应的作用。
　　 我们比较了大鼠在无晕动病、发生晕动病及给予地塞米松抗晕动病情况下，血浆中内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺(AEA)与2-花生四烯酸-甘油(2-AG)的含量;检测迷走神经复合体和胃中这两种物质的代谢酶—N-酰基-磷脂酰肌醇磷脂酶D(NAPE-PLD)、二酰甘油脂肪酶(DAGL-a)、脂肪酰胺水解酶(FAAH)、单酰甘油脂酶(MAGL) mRNA表达，以及在迷走神经复合体和胃中，与内源性大麻素抗恶心呕吐作用密切相关的大麻素CB-1受体的表达情况;并使用大麻素CB-1受体拮抗剂(AM-251)拮抗内源性大麻素受体，从而尝试阐述内源性大麻素系统在晕动病中的作用，以及地塞米松抗晕动病可能的作用机制;此外，通过比较大鼠晕反应指数，记录大鼠体重变化情况;观察大鼠自发活动次数与总路程、大鼠转棒活动时间，来研究醋酸地塞米松联合不同剂量人参皂苷Rg1、Re对模拟晕船刺激大鼠抗晕动病以及减轻单用醋酸地塞米松不良反应的作用。
　　 研究目的:
　　 通过对地塞米松抗晕动病作用机制的初步探讨，以及对醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1、Re抗大鼠模拟晕船刺激的研究，为地塞米松抗晕动病的临床应用奠定动物实验基础。
　　 研究方法:
　　 一、地塞米松抗大鼠晕动病的作用机制研究
　　 （一）实验动物分组
　　 33只SD大鼠，六周龄，体重在190g-240g之间（购自中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司），适应性喂养5天，按体重随机分为四组。对照组(n=8)，观看加速度刺激过程，感受加速度刺激声音，但不给予加速度刺激;加速度刺激模型组(n=8)，灌胃水30分钟后给予加速度刺激;地塞米松组(n=8)，灌胃地塞米松(0.05mg/kg)30分钟后给予加速度刺激;AM-251/地塞米松组(n=9)，灌胃AM-251(5mg/kg)，15分钟后灌胃地塞米松(0.05 mg/kg)，30分钟后给予加速度刺激。地塞米松给予的剂量和方式都是通过本教室前期试验比较得出的。
　　 （二）加速度暴露及动物组织处理
　　 1、加速度刺激方法
　　 将加速度刺激模型组，地塞米松组，AM-251/地塞米松组大鼠放入按Crampton等报道仿制的旋转装置内，绕垂直轴顺时针旋转，以16°/s2角加速度加速至120°/s2，再以48°/s2角减速度减速至零，交替加、减速进行，持续30分钟。对照组大鼠静置30分钟，观看加速度刺激过程，感受加速度刺激声音。实验结束后立即检测大鼠的晕反应指数。
　　 2、晕反应指数评分标准
　　 晕反应指数的评价标准包括:排便颗粒每个记1分，无则记0分;小便有记1.2分，无记0分;立毛严重记1.2分，轻微记0.6分，无记0分;颤抖记1.2分，无记0分;晕反应指数是这四部分分数的总和。
　　 3、动物组织处理
　　 大鼠模拟晕船刺激结束后，用10％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉，心脏穿刺取血，室温静置30min后，以3000rpm4℃离心20 min，收集血浆，置于-80℃保存。心脏灌流0.9％NaCl溶液，取迷走神经复合体和胃组织，置于-80℃保存。
　　 （三）大鼠血浆AEA，2-AG水平的测定
　　 HPLC-MS/MS方法检测对照组，加速度刺激模型组和地塞米松组大鼠血浆中AEA、2-AG的水平。
　　 （四）大鼠迷走神经复合体及胃组织NAPE-PLD、DAGL-a、FAAH、及MAGL mRNA表达的测定
　　 采用实时定量荧光PCR法测定大鼠迷走神经复合体和胃组织中N-酰基-磷脂酰肌醇磷脂酶D(NAPE-PLD)，二酰甘油脂肪酶(DAGL-a)，脂肪酰胺水解酶(FAAH)，单酰甘油脂酶(MAGL) mRNA的表达水平。
　　 （五）大鼠迷走神经复合体及胃组织中cannabinoid-1受体(CB1R) mRNA表达及蛋白含量的测定
　　 采用实时定量荧光PCR法测定大鼠迷走神经复合体和胃组织中CB1R mRNA的表达水平，western-blot法测定大鼠迷走神经复合体和胃组织中CB1R的蛋白含量。
　　 二、醋酸地塞米松联合人参皂苷Re，Rg1抗大鼠晕动病作用效果的研究
　　 （一）实验动物分组
　　 雄性SD大鼠(250g-300g)，54只，购自中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司。每笼饲养5只，适应期内动物自由进食普通饲料和饮水。动物饲养实验室环境温度22℃±2℃，湿度50％～60％，室内照明控制在12/12hr昼夜节律变化(8:00～20:00光照)。SD大鼠适应性喂养一周，按体重随机分成8组，即空白对照组(n=6)，灌胃蒸馏水1ml/100g体重;加速度刺激模型组(n=6)，灌胃蒸馏水1ml/100g体重;Rg1和Re组(n=6)，灌胃Rg1，2mg/kg体重，Re，0.5 mg/kg体重;阳性药物对照组(n=6)，灌胃东莨菪碱1mg/kg体重;醋酸地塞米松组(n=6)，灌胃醋酸地塞米松0.05mg/kg体重;组方低剂量组(n=8)，灌胃醋酸地塞米松0.05mg/kg体重，Rg1，1mg/kg体重，Re0.2mg/kg体重;组方中剂量组(n=8)，灌胃醋酸地塞米松0.05mg/kg体重，Rg1，2mg/kg体重， Re0.5mg/kg体重;组方高剂量组(n=8)灌胃醋酸地塞米松0.05mg/kg体重，Rg1.5mg/kg体重，Re1mg/kg体重。
　　 （二）加速度暴露及晕反应指数记录
　　 1、加速度刺激方法
　　 将加速度刺激组、地塞米松组、组方高、中、低剂量组大鼠放入按Crampton等报道仿制的旋转装置内，绕垂直轴顺时针旋转，以16°/s2角加速度加速至120°/s2，再以48°/s2角减速度减速至零，交替加、减速进行，持续30分钟。空白对照组大鼠静置30分钟，观看加速度刺激过程，感受加速度刺激声音。实验结束后立即检测大鼠的晕反应指数。
　　 2、晕反应指数评分标准
　　 晕反应指数的评价标准包括:排便颗粒每个记1分，无则记0分;小便有记1.2分，无记0分;立毛严重记1.2分，轻微记0.6分，无记0分;颤抖记1.2分，无记0分;晕反应指数是这四部分分数的总和。
　　 （三）体质量改变情况
　　 每日上午9点称量大鼠体质量。
　　 （四）转棒实验
　　 模拟晕船刺激结束后立即置于转棒仪上，记录大鼠在转棒仪上活动的时间。
　　 （五）自发活动实验
　　 大鼠在模拟晕船刺激结束后立即置于全封闭自主运动箱中，红外线自动跟踪动物3分钟的运动，数据均采用Winfast软件进行实时记录并计算运动轨迹和参数。
　　 三、数据的统计与处理
　　 实验数据采用SPSS16.0统计软件包进行统计分析。多组间采用单因素方差分析及重复测量设计资料的方差分析，各组间两两比较采用LSD检验和SNK-q检验;实验数据以平均数±标准差（(x)±s）表示，P＜0.05认为差异具有统计学意义。
　　 结果:
　　 一、地塞米松抗大鼠晕动病作用机制的研究
　　 （一）四组大鼠间晕动病严重程度比较
　　 加速度暴露后，加速度刺激模型组大鼠晕反应指数(MSI=12±3.31)与空白对照组(MSI=3.2±1.0)相比，出现了明显的升高(P＜0.001);地塞米松组大鼠晕反应指数(MSI=4.4±1.36)与空白对照组(MSI=3.2±1.0)相比，差异没有统计学意义（P＞0.05）;AM-251/DEX组大鼠晕反应指数(MSI=8.53±1.18)高于空白对照组(MSI=3.2±1.0)及地塞米松组(MSI=4.4±1.36)，差异具有统计学意义(P＜0.001; P＜0.001); AM-251/DEX组大鼠晕反应指数(MSI=8.53±1.18)低于加速度刺激模型组(MSI=12±3.31)，差异具有统计学意义(P＜0.05）。
　　 （二）大鼠血浆中AEA,2-AG+1-AG的浓度比较
　　 AEA在三组大鼠血浆中的水平相近，差异无统计学意义（P＞0.05），分别是空白对照组(7.60±1.07 ng/ml)，加速度刺激模型组(6.19±0.98 ng/ml)，地塞米松组(7.39±1.92ng/ml)。大鼠血浆中2-AG+1-AG的检测结果为，与对照组和地塞米松组大鼠相比，加速度模型组大鼠出现了明显的降低（P＜0.05），三组2-AG+1-AG浓度分别是对照组(67±19.84 ng/ml)，加速度模型组(32.39±10.91 ng/ml)，地塞米松组(54.28±20.28 ng/ml)。
　　 （三）内源性大麻素合成酶、降解酶NAPE-PLD，FAAH，DGL-a和MAGL mRNA在大鼠迷走神经复合体和胃中的变化情况
　　 在迷走神经复合体中，与对照组相比，地塞米松组AEA合成酶NAPE-PLD mRNA表达明显低于空白对照组(P＜0.01);地塞米松组AEA分解酶FAAH mRNA表达明显高于空白对照组（P＜0.01）与加速度刺激模型组（P＜0.05）;加速度刺激组大鼠2-AG合成酶DGL-a mRNA表达明显低于空白对照组(P＜0.001)和地塞米松组(P＜0.01）;加速度刺激组大鼠与地塞米松组大鼠2-AG降解酶MAGL mRNA表达，均明显低于空白对照组(P＜0.01;P＜0.01)。
　　 在胃组织中，三组大鼠NAPE-PLD mRNA表达比较，无统计学差异(P＞0.05）;加速度刺激组大鼠FAAH mRNA表达明显高于空白对照组(P＜0.01）及地塞米松组（P＜0.05）;加速度刺激组与地塞米松组大鼠DGL-a mRNA表达均明显高于空白对照组（P＜0.05;P＜0.05）;加速度刺激组大鼠MAGL mRNA表达明显高于空白对照组(P＜0.01）及地塞米松组（P＜0.05）。
　　 （四）大鼠迷走神经复合体和胃组织中大麻素CB1受体mRNA和蛋白的变化情况
　　 加速度模型组大鼠迷走神经复合体和胃组织中CB1受体mRNA表达均低于空白对照组(P＜0.05; P＜0.001)，而地塞米松组CB1受体表达与空白对照组相比没有显著性差异(P＞0.05）。
　　 加速度模型组大鼠迷走神经复合体和胃组织中CB1受体蛋白表达均低于空白对照组及地塞米松组(P＜0.01;P＜0.05)，而地塞米松组CB1受体表达与空白对照组相比没有显著性差异(P＞0.05）。
　　 二、醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re抗晕动病作用的动物实验研究
　　 （一）醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re对模拟晕船刺激大鼠晕反应指数的影响
　　 模拟晕船刺激后，加速度刺激模型组组大鼠晕反应指数明显高于空白对照组，差异具有统计学意义(P＜0.001)。阳性药物对照组、醋酸地塞米松组、组合低、中、高剂量组大鼠晕反应指数均低于加速度刺激模型组(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05)，且阳性药物对照组、醋酸地塞米松组、组合低、中剂量组大鼠晕反应指数与空白对照组相比，差异无统计学意义(P＜0.05）。
　　 （二）醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re对模拟晕船刺激大鼠体质量的影响
　　 实验前一天，实验当天，实验后一天，实验后两天大鼠体重均发生了变化;实验前后大鼠体重的变化与空白对照组，阳性药物对照组，加速度刺激组，Re与Rg1合剂组，醋酸地塞米松组，组方低剂量组，组方中剂量组和组方高剂量组之间有交互作用。
　　 （三）醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re对模拟晕船刺激大鼠转棒活动时间的影响
　　 模拟晕船刺激之后，阳性药物对照组大鼠转棒活动时间，明显低于空白对照组和加速度刺激模型组大鼠，差异均具有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。组合中剂量组大鼠转棒活动时间高于空白对照组、加速度刺激组和阳性药物对照组(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.001)。组合高剂量组大鼠转棒活动时间高于空白对照组、加速度刺激组和阳性药物对照组(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.001)。
　　 （四）醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re对模拟晕船刺激大鼠自发活动的影响
　　 1、醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re对模拟晕船刺激大鼠自发活动总路程的影响
　　 模拟晕船刺激之后，加速度刺激模型组、Re与Rg1合剂组、阳性药物对照组、醋酸地塞米松组大鼠自发活动总路程均低于空白对照组(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.05); Re与Rg1合剂组，醋酸地塞米松组，组方低剂量组，组方中剂量组，组方高剂量组大鼠自发活动总路程高于加速度刺激组(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001)和阳性药物对照组大鼠(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001)。组方低、中、高剂量组大鼠自发活动总路程与空白对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05）。
　　 2、醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re对模拟晕船刺激大鼠自发活动次数的影响
　　 模拟晕船刺激之后，加速度刺激组，Re与Rg1合剂组、阳性药物对照组大鼠自发活动次数均低于空白对照组大鼠(P＜0.001，P＜0.05，P＜0.001);醋酸地塞米松组，组方低剂量组，组方中剂量组，组方高剂量组大鼠自发活动次数均高于加速度刺激组大鼠(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.01,P＜0.01)。
　　 结论:
　　 1、地塞米松抗晕动病的作用可能部分是通过调节迷走神经复合体和胃中CB1受体的表达及调节血中2-AG+1-AG浓度来完成的。
　　 2、醋酸地塞米松联合中剂量人参皂苷Rg1，Re可以增强模拟晕船刺激大鼠抗晕动病能力，学习记忆能力，增强大鼠体力活动，减小单用醋酸地塞米松影响大鼠体增重的不良反应，且不具有其他抗晕船药物的中枢抑制不良反应。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 地塞米松通过调节内源性大麻素系统发挥抗晕动病作用的研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、小结

第二部分 醋酸地塞米松联合人参皂苷Rg1，Re抗大鼠晕动病作用效果的研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、小结

全文总结

综述

参考文献

在读期间发表论文和参加科研工作情况说明

致谢