克鲁佩尔因子2及其上下游通路在血流动力学诱导的动脉瘤生长中的作用

摘要

第一部分KLF2在血流动力学诱导的动脉瘤动物模型中的表达 目的:观察不同方法构建的血流动力学诱导动脉瘤模型中克鲁佩尔因子2(KLF2)的表达及与基底动脉血流速度变化的相关性。 方法:雄性新西兰白兔144只，随机分成三组:假手术组、单侧颈总动脉结扎组、双侧颈总动脉结扎组，每组48只，每组各分为术后1周、2周、3周和4周组，每组12只。假手术组仅切开颈部暴露颈总动脉不结扎，单侧结扎组统一结扎右侧颈总动脉，双侧结扎组进行双侧颈总动脉结扎。各组分别在术后1周、2周、3周、4周行经颅多普勒超声测量基底动脉血流速度。然后在各时间点处死动物，每组每个时间点取6只基底动脉分叉部进行HE染色、EVG染色、Masson染色、KLF2免疫组化染色等病理检测，另外6只基底动脉行KLF2westernblot蛋白分析。 结果:各组基底动脉平均血流速度测量结果，在假手术组术后不同时间点变化不明显，单侧颈总动脉结扎组术后血流速度较假手术组增加，但统计学结果提示无显著差异(P＞.05)。双侧颈总动脉结扎组流速明显快于假手术组和单侧颈总动脉结扎组，有显著统计学意义(p＜0.05)。病理学检查结果提示按照动脉瘤评价标准，假手术组基底动脉尖端管腔平滑，内皮细胞完整，内弹力膜完整，无断裂和变薄，全组无动脉瘤形成。右侧结扎组中24只动物模型中有1只基底动脉尖端略向外膨出，但膨出程度比较低。双侧结扎组中有12只向外凸出的动脉瘤样突起，统计分析表明三组间具有显著统计学差异(p＜0.05)。KLF2westernblot定量分析提示假手术组基底动脉的KLF2蛋白表达随时间变化无明显变化，而单侧结扎组蛋白表达随时间变化有所增加，但增加较少。双侧结扎组KLF2蛋白表达在术后1W起即有显著增加，随后一直维持在较高水平，统计结果显示与假手术组和单侧结扎组相比具有统计学意义(P＜0.05）。KLF2蛋白表达与血流速度变化相关分析表明二者具有显著正相关性（r=0.845，P＜0.05）。 结论:1、采用兔双侧颈总动脉结扎法建立的单纯血流动力学诱导的动脉瘤模型引起的血流动力学变化最为明显，更适合做为动脉瘤研究的动物模型。 2、KLF2的表达变化与血流速度变化具有一致性，相关分析提示二者明显正相关，提示其表达受血流动力学调控。 第二部分KLF2上游调控因子miR-92a在血流动力学诱导动脉瘤动物模型中的表达 目的:利用不同方法构建的血流动力学诱导的动脉瘤模型，采用RT-PCR法检测各组基底动脉分叉部miRNA-92a的表达差异，探讨其对KLF2的表达的调控作用。 方法:雄性新西兰白兔72只，随机分成假手术组、单侧颈总动脉结扎组、双侧颈总动脉结扎组各24只，每组各分为术后1周、2周、3周和4周组，每组6只。然后在各时间点处死动物，取基底动脉分叉部进行RT-PCR检测miRNA-92a的表达差异。其表达结果与基底动脉血流速度进行相关分析。 结果:单侧结扎组和双侧结扎组基底动脉分叉部mir-92amRNA表达水平较假手术组明显降低。双侧结扎组降低最为明显，与假手术组和单侧结扎组相比具有显著统计学差异（P＜0.05）。mir-92a的mRNA表达水平与KLF2蛋白表达相关分析表明二者显著呈负相关（r=-0.768，P＜0.01），而与基底动脉血流速度相关分析提示二者亦呈负相关（r=-0.709，P＜0.01）。 结论:miRNA-92amRNA表达随血流速度的增加而表达下降，且与血流速度的变化具有负相关性;说明miRNA-92amRNA表达受血流动力学调控。miRNA-92a表达与KLF2表达趋势相反，二者呈显著负相关。 第三部分辛伐他汀对KLF2及下游因子在动脉瘤模型中的表达影响 目的:探讨KLF2/eNOS、VCAM-1、MMP-9通路在动脉瘤发生中的作用机制及辛伐汀抑制动脉瘤生长的作用。 方法:新西兰白兔72只，随机分成二组:双侧颈总动脉结扎后辛伐他汀干预组、双侧颈总动脉结扎组各36只，每组各分为术后1周、4周，每组18只。辛伐他汀组自动物双侧颈总动脉结扎术后当天起，即给予辛伐他汀25mg/kg/d，自由进食水不限。此后每隔24h投予相同剂量的辛伐他汀，直至术后1周、4周。双侧结扎组术后除不予药物处理外，余同辛伐他汀组。每组术后1周、4周分别取6只兔子基底动脉行病理切片观察，另外每组12只分别行PCR和Westernblot检测。另取6只假手术组兔子基底动脉作为对照检测eNOS、VCAM-1和MMP-9mRNA表达。 结果:二组在1W和4W时基底动脉分叉部动脉瘤样改变在发生数量上无显著差异，但在辛伐他汀干预组基底动脉分叉部内弹力膜薄弱长度缩短（P＜0.05）、中层平滑肌变薄程度轻（P＜0.05）和瘤体最长径较双侧结扎组缩小，具有显著统计学差异(P＜0.05)。辛伐他汀组基底动脉分叉部样本中，VCAM-1和MMP-9mRNA在术后1W和术后4W其表达均下降，而eNOSmRNA表达上升，且与双侧结扎组相同时间点比较具有显著统计学意义（P＜0.05）。KLF2Western-blot蛋白半定量结果发现:KLF2的表达升高，在4W时升高更为明显，与双侧结扎组比较，其表达具有显者的统计学差异（P＜0.05） 结论:辛伐他汀在25mg/kg/d的剂量，能显著上调双侧结扎组KLF2的表达。KLF2/eNOS、VCAM-1、MMP-9途径参与了颅内动脉瘤发生。辛伐他汀能够减轻基底动脉分叉部动脉瘤样凸起的病理改变。

目录

声明

摘要

英文缩写一览表

前言

参考文献

第一部分 克鲁佩尔因子2(KLF2)在血流动力学诱导的动脉瘤动物模型中的表达

一、主要实验材料

二、主要实验方法

三、结果评价

四、统计学分析

结果

讨论

结论

参考文献

第二部 分KLF2上游调控因子miR-92a在血流动力学诱导的动脉瘤动物模型中的表达

一、主要实验材料

二、主要试剂配制

三、主要实验方法

四、结果评价

五、统计学分析

结果

讨论

结论

参考文献

第三部分 辛伐他汀对KLF2及下游因子在动脉瘤模型中的表达影响

一、主要实验材料

三、主要实验方法

四、结果评价

五、统计学分析

结果

讨论

结论

参考文献

全文结论

文献综述 血流动力学诱导炎性反应在颅内动脉瘤发生中的机制

研究生期间主要发表论文

致谢