miR-150在结膜MALT淋巴瘤中的表达和细胞功能学研究

摘要

一、研究背景及目的:
　　黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma)简称MALT淋巴瘤，占所有B细胞淋巴瘤的7％～8％，可见于胃肠道、肺、甲状腺、口腔及眼附属器等部位。眼部的MALT淋巴瘤是中老年人中最常见的眼眶恶性淋巴瘤。在我国的眼附属器淋巴瘤(ocular adnexal lymphoma，OAL)中，MALT淋巴瘤占80％以上。眼附属器MALT淋巴瘤可出现在眼睑、泪腺、结膜等部位。近年来，随着肿瘤检测技术的发展、人们居住环境和生活习惯的改变，眼附属器MALT淋巴瘤的发病率不断上升，但该病的发病机制一直不是十分清楚。因此，针对眼附属器MALT淋巴瘤的发病机制的研究对临床上诊断、治疗以及判断预后有至关重要的作用。
　　微小RNA(microRNAs，miRNAs)是一种长约18～25nt的非编码小片段RNA，广泛存在于植物和动物中。近些年来，针对miRNAs在肿瘤中调控基因表达的相关研究已成为医学界中热门的研究方向。miRNAs通过剪切或转录抑制等方式调控靶向mRNA来参与细胞增殖、分化、凋亡和胚胎发育等一系列重要生命过程。miR-150是由22个核苷酸组成的非编码小分子RNA，定位于人类染色体19q13.33，它对B细胞和T细胞的成熟、胚胎发育以及干细胞分化等发挥重要作用。
　　通过targetscan程序并结合MALT淋巴瘤表达谱特征，我们选定miR-150靶向抑癌基因cbl-b作为本次试验的研究对象。由此推测miR-150与cbl-b存在着调控关系，并在结膜MALT淋巴瘤的发生发展中发挥着重要的作用。
　　研究目的：本实验旨在检测miR-150与cbl-b在结膜MALT淋巴瘤组织中的表达情况，并对miR-150的细胞功能学进行相关研究，为miR-150在结膜MALT淋巴瘤中的作用提出一些初步的猜想。
　　二、研究方法、结果:
　　（一）结膜MALT淋巴瘤标本miR-150和cbl-b表达水平的检测
　　本研究共收集了第二军医大学长征医院眼科于2016年7月至2016年10月收治的共3例（3眼）的结膜MALT淋巴瘤，患者均为汉族男性，年龄分别为68岁、71岁，均为EI期淋巴瘤。所有患者均已排除除结膜MALT淋巴瘤外的其它疾病。所有病例都经手术治疗，术后经我院病理科确诊为MALT淋巴瘤，实验用肿瘤和对照组织均为在手术时切取的新鲜标本。我们采用实时定量荧光PCR方法检测肿瘤组织和癌旁组织的miR-150和cbl-b表达水平。
　　结果提示：相对于对照组织，肿瘤组织中miR-150表达水平明显升高，cbl-b表达水平明显下调。
　　（二）B细胞淋巴瘤细胞(RPMI8226)的培养和miR-150inhibitor转染效率测定
　　RPMI8226细胞作为一种常用的人源B淋巴瘤细胞系，我们选取它作为本实验的研究对象，并使用miR-150抑制剂对其进行转染，观察并记录转染情况。
　　结果提示：DMRIE-C1.5μL，miR-150抑制剂2μL，无血清转染组效果最好。
　　（三）抑制miR-150对RPMI8226细胞增殖、迁移与侵袭、凋亡的影响
　　本实验环节，我们应用miR-150抑制剂转染成功的RPMI8226细胞株模型，研究miR-150对RPMI8226细胞功能学的影响。我们把RPMI8226细胞分别转染阴性对照组和miR-150抑制剂组，分别进行CCK8增殖实验、流式细胞技术检测和Transwell实验。
　　结果提示：(1)转染120h后，与阴性对照组相比，miR-150抑制剂组可以显著抑制RPMI8226细胞的增殖，P＜0.001;(2)与正常组和阴性对照组相比，miR-150抑制剂组的细胞凋亡显著增加(P＜0.001);(3)与阴性对照组相比，miR-150抑制剂组中RPMI8226细胞的迁移与侵袭均出现抑制(P＜0.05)。
　　三、研究结论:
　　通过以上实验，我们得出结论：miR-150在结膜MALT淋巴瘤组织中的表达显著上调，其抑癌靶基因cbl-b在结膜MALT淋巴瘤组织中的表达明显下调;进一步体外细胞实验提示：抑制miR-150的表达可对B细胞淋巴瘤细胞(RPMI8226)相关生物学功能及特性产生抑制作用，这说明miR-150在结膜MALT淋巴瘤的发生发展中可能发挥重要作用，其抑癌靶基因cbl-b也有望成为结膜MALT淋巴瘤的一种新的靶向分子。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 miR-150和cbl-b在结膜MALT淋巴瘤中表达水平的检测

一、材料与方法

二、实验结果

三、讨论

四、结论

第二部分 miR-150的细胞生物功能学研究

一、材料与方法

二、实验结果

三、讨论

四、结论

综述 眼附属器粘膜相关组织淋巴瘤的研究进展

参考文献

致谢