抗禽流感天然产物筛选及八仙草化学成分研究

摘要

高致病性禽流感（Highly Pathogenic Avian Influenza，HPAI）自1878年在意大利首次暴发以来，已在世界范围内发生了20多次，每次暴发都造成了严重的经济损失和社会恐慌。目前有效治疗高致病性禽流感病毒(Highly PathogenicAvian Influenza Virus)的药物比较少。
　　 本课题选择A/Tiger/Harbin/01/2002株简称(HAB/01)H5N1病毒感染MDCK细胞为活性筛选模型，通过细胞病变法（Cytopathic Effect，CPE）作为初步筛选的活性评价方法，对40种中草药进行体外活性筛选。首次发现了几种抗H5NI病毒作用显著的中草药。首先发现八仙草（Galium aparine L）有较强的抗H5N1病毒作用。通过活性追踪发现，八仙草的抗H5N1病毒活性成分集中在正丁醇25‰-50％乙醇洗脱部位，抗病毒作用呈明显的效量依赖关系。
　　 八仙草为茜草科拉拉藤属一年生草本，该植物资源丰富，目前国内还没有开展相关的化学成分研究和开发。本课题通过生物活性跟踪并结合化学导向的研究路线，对八仙草抗H5N1病毒活性部位进行系统分离，综合运用多种分离手段对有效部位进行系统的分离纯化。分离得到33个单体化合物。通过理化测定和采用ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMQC、HMBC、NOESY等波谱手段，鉴定了26个化合物。分别是：去乙酰车叶草酸(1)，1-羟基-3-异戊烯基-2-萘甲酸甲酯-4-O-B-D-木糖苷(2)，3-异戊烯基-2-萘酸甲酯-l，4一二-O-BD一葡萄糖苷(3)1，3，6---羟基-2-甲基葸醌-3-O-a-鼠李糖(1一2)-O-β-D-葡萄糖苷(4)，l，3-二羟基蒽醌(5)，7S，8R,8'R-（一）-落叶松脂醇一4，4_二-0-β葡萄糖苷(6)3’，4’，3，5，7一五羟基黄酮(7)，3，4’，5，7．四羟基黄酮(8)，3’，5，7-三羟基黄酮(9)．4，-甲氧基-5-羟基黄酮-7-O-a-鼠李糖(1一6）-βD．葡萄糖苷(10)，4’，5，7-三羟基黄酮-3-O-a-鼠李糖(1-2)-βD-葡萄糖苷(ll)，4'-甲氧基-3'5，7．三羟基黄酮-3-O-a-鼠李糖(1_6)β-D-葡萄糖苷(12)，尿嘧啶(13)，胞嘧啶(14)，尿嘧啶核苷(15)，胸腺嘧啶脱氧核苷(17)，腺嘌呤核苷(18)，对羟基苯甲酸(19)，原儿茶酸(20)，香草酸(21)，咖啡酸(22)，β-谷甾醇(23)，β-胡萝卜苷(24)，正十六烷酸(25)，杜鹃花酸(26)，其中(2)为新化合物。
　　 通过细胞病变法(Cytopathic Effect，CPE)对分离得到的部分化合物进行抗H5N1病毒活性评价，结果发现去乙酰车叶草酸(1)有明显的抗H5N1病毒活性，药物浓度为37.5ug/mL时，CPE结果为一个“+”，且有较好的剂量依赖关系。