牛体外受精卵体外发育影响因素的研究

摘要

本研究的目的是在己有的基础上对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外发育作进一步研究，重点进行了血清的添加浓度和牛胎儿睾丸支持细胞(Sertoli cells，SCs)对牛体外受精卵体外发育的影响的研究。旨在提高牛体外受精卵的卵裂率和囊胚发育率。本试验从以下几个方面进行研究： 1.为了探讨在牛受精卵培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响，确定血清在合成输卵管液(Synthetic oviduct fluid，SOF)中合适的添加浓度及添加时期，以筛选优良的牛体外受精卵体外培养体系。在SOF液中分别添加10％新生牛血清(Newborn bovine serum，NBS)、8 g/L牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)和1 g/L聚乙烯醇(Polyvinyl alcohol，PVA)进行牛体外受精卵的全程培养。结果显示，SOF培养液中添加PVA，BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降，说明PVA或BSA不能达到血清的效果。在受精卵培养的最初48 h用5％NBS，之后用10％NBS培养液时，卵裂率(66.3％)和囊胚发育率(30.9％)与SOF+10％NBS全程培养组(58.7％，29.3％)差异不显著(P>0.05)。说明体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式，不会影响牛体外受精卵体外发育效果。比较发情第7天的母牛血清(7<'th>day oestrus COW serum，OCS)与NBS的效果，结果SOF+10％NBS组与SOF+10％OCS组的卵裂率、囊胚率差异不显著，发情牛血清可替代NBS用于牛早期胚胎的体外培养。 2.研究体外不同阶段牛胎儿睾丸SCs对牛受精卵体外发育的影响。从屠宰场采集5～7月龄牛胎儿睾丸，经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸SCs单层，对比原代与传代胎牛睾丸SCs饲养层与牛体外受精卵共培养时受精卵的发育情况；分别以4×10<'4>/mL与2×10<'4>/mL两个密度接种传代胎牛睾丸支持细胞与牛受精卵共培养，并设对照组。牛体外受精卵与传代牛胎儿睾丸SCs共培养组，卵裂率(79.3％)高于原代SCs组(69.2％)，差异不显著(P>0.05)；囊胚发育率(41.3％)极显著高于原代SCs组(16.7％)(P<0.01)。传代2.0×10<'4>/mL密度SCs共培养组卵裂率与传代4.0×10<'4>/mL密度SCs共培养组的卵裂率差异不显著，胚胎发育率随着饲养层的密度增大明显下降。 结论为，传代牛胎儿睾丸SCs制备的饲养层能有效促进牛体外受精卵的体外发育，提高囊胚质量；传代接种的牛胎儿睾丸SCs饲养层密度过大，将严重影响牛体外受精卵的发育。

目录

文摘

英文文摘

声明

综述部分

第一章牛体外受精研究进展

1.1牛体外受精研究简史

1.2牛卵母细胞的采集

1.3牛卵母细胞的体外成熟

1.4精子的体外获能

1.5精卵共孵育

1.6早期胚胎体外培养（In vitro culture,IVC）

试验研究

第二章培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

第三章牛体外受精卵与牛胎儿睾丸支持细胞体外共培养研究

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

3.4小结

结论

参考文献

致谢

作者简介