西藏野生披碱草遗传多样性的SSR与AFLP标记比较研究

摘要

本研究利用SSR和AFLP两种分子标记对搜集的9份西藏披碱草属野生牧草及8份对照材料进行遗传多样性研究。旨在从分子水平上评价西藏地区野生披碱草属种质资源的遗传多样性，以期为西藏地区披碱草属植物种质资源的保护和利用提供科学依据。同时比较两种分子标记技术在评价披碱草属牧草种质资源遗传多样性中的有效性。主要结果如下： 1.在前人研究的基础上，通过对披碱草属的SSR反应体系和反应程序进行优化，成功建立了适于披碱草属SSR分析的最佳反应体系和反应程序，也证明了近缘属微卫星引物的通用性。 2.通过参考前人在研究其他植物上的AFLP反应体系和反应程序，首次建立了披碱草属植物的AFLP银染体系。 3.SSR标记：筛选32对引物，其中14对引物有扩增条带，具有多态性且扩增效果较好的引物有8对。用筛选出的8对引物对供试的17份材料进行微卫星分析，共检测出69个位点，其中59个位点有多态性，平均每对引物所产生的多态性位点数为7.4个位点；西藏9个居群间遗传相似系数为0.273～0.900，变异幅度较大，说明西藏地区野生披碱草属植物具有较丰富的遗传多样性。UPGMA聚类分析表明，在相似系数阈值为0.59时，17份材料可大致分为5类，基本上反映了材料间的亲缘关系，表明SSR标记能够用于披碱草属植物的遗传多样性研究。 4.AFLP标记：筛选16对引物组合，其中扩增效果较好的引物组合有3对，共扩增出232个位点，每对引物组合可扩增出70～83个位点。其中206个位点有多态性，平均每个引物产生68.67个多态性位点。17个居群的遗传相似性指数在0.284～0.955之间，UPGMA聚类分析表明，当相似系数为0.59时，17个居群可以明显地划分为4类。 5.SSR标记和AFLP标记比较：SSR标记产生的位点多态性百分率为85.5％，AFLP标记产生的位点多态性百分率为88.79％。SSR标记平均每对引物产生8.6个等位位点，而AFLP标记平均每对引物组合产生68.67个等位位点。与SSR标记相比较，AFLP标记能更有效地评价群体的遗传多样性。根据这两种分子标记实验结果所得到的聚类图，AFLP标记聚类图更加真实反映了17份供试材料的亲缘关系。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词(Abbreviation)

声明

第一章引言

1.1遗传多样性的研究

1.1.1遗传多样性的含义和研究意义

1.1.2遗传多样性检测方法

1.2披碱草属研究进展

1.2.1披碱草属的分类

1.2.2种间杂交利用

1.2.3遗传多样性研究

1.3研究的目的意义

第二章披碱草种质资源遗传多样性的SSR分子标记分析

2.1材料与方法

2.1.1供试材料

2.1.2实验仪器及药品

2.1.3实验方法

2.1.4数据处理

2.2结果与分析

2.2.1提取DNA的结果

2.2.2引物筛选结果

2.2.3体系优化结果

2.2.4 SSR标记测定结果

2.2.5西藏9个披碱草属植物居群间的遗传变异分析

2.2.6 17个披碱草居群的UPGMA聚类分析

2.3讨论

2.3.1关于影响披碱草SSR技术体系的关键因素

2.3.2披碱草属植物遗传多样性的分子标记

2.3.3西藏野生牧草种质资源的保护

第三章披碱草种质资源遗传多样性的AFLP分析

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2实验药品及仪器

3.1.3实验方法

3.1.4数据处理

3.2结果与分析

3.2.1引物筛选结果

3.2.2酶切结果

3.2.3连接结果

3.2.4预扩增结果

3.2.5选择性扩增结果

3.2.6选择性扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶上的电泳银染结果

3.2.7 AFLP标记测定结果

3.2.8 17个披碱草属植物居群间的遗传变异分析

3.2.9 17个披碱草属植物居群的UPGMA聚类分析

3.3.讨论

3.3.1影响AFLP实验成功的关键因素

3.3.2 AFLP标记的发展前景及在披碱草属植物遗传多样研究中的可行性

第四章SSR与AFLP两种分子标记方法的对比分析

4.1两种方法的比较

4.1.1试验流程的比较

4.1.2 SSR和AFLP多态性引物筛选

4.1.3 SSR和AFLP扩增效率的比较

4.1.4 SSR和AFLP聚类结果比较

4.2讨论

4.2.1披碱草种质资源研究中分子标记的选择

4.2.2 SSR和AFLP在评价披碱草属植物遗传多样性中的有效性

4.2.3种质资源研究中标记的选择及其分析

第五章结论

参考文献

附 录

致 谢

作者简介