抗MATSA单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

马立克氏病(Marek’sdisease，MD)肿瘤相关表面抗原(Marek’sdiseasetumor-associatedsurfaceantigen，MATSA)是MD肿瘤细胞和MD成淋巴系细胞表面存在的特异性抗原，可刺激机体产生对MD免疫非常重要的抗肿瘤免疫应答，并可用于MD的鉴别诊断。本研究用纯化的MATSA免疫Balb/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株，并对阳性杂交瘤细胞染色体进行分析。将阳性杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备单克隆抗体(McAb)腹水，硫酸铵盐析法粗提McAb并鉴定亚类。通过制备MATSA的McAb，为进一步研究MD肿瘤提供试验材料和理论依据。研究取得如下结果。 1.以纯化的MATSA为抗原免疫5只Balb/c小鼠，共免疫6次，间接ELISA测定小鼠血清中MATSA抗体。结果表明，第3次免疫后，测得各小鼠血清中抗体效价分别为26、26、24、26、26；第4次免疫后，抗体效价分别为26、26、26、26、27；第5次免疫后，抗体效价分别为28、28、29、28、28；第6次免疫后，抗体效价分别为213、213、213、213、213，抗体效价明显升高，可以用于制各MATSA的McAb。 2.先后取免疫好的2只小鼠脾细胞，进行了2次细胞融合，第一次用3号小鼠，融合后未出现杂交瘤细胞，第二次用1号小鼠，融合后铺4块板，共384个孔，其中116个孔有融合细胞，融合率为30.2％。经间接ELISA法筛选，抗体阳性孔为22个，阳性率为19％。从阳性孔中选阳性OD值高、生长状态好的孔，用有限稀释法经过3次克隆，筛选到3株能稳定分泌抗MATSA单克隆体的细胞株。杂交瘤细胞传代培养、液氮冻存及复苏后仍能稳定地分泌抗体，ELISA检测阳性细胞培养上清效价达26。 3.对筛选出的3株杂交瘤细胞用秋水仙素阻断法进行核型分析，杂交瘤细胞染色体数目为52±2对，接近两种亲本细胞染色体数目总和，证明为两种亲本细胞融合后的杂交体。 4.将杂交瘤细胞株细胞腹腔注射100只Balb/c小鼠，收集腹水，腹水中MATSA抗体效价为210。共收集336mL腹水，经饱和硫酸氨粗提，真空冷冻干燥，获得抗MATSA粗提抗体16.80g。经MSB1间接免疫荧光染色实验表明，制备的单抗与MSB1细胞有阳性反应。

目录

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文献综述　第一章人源化抗体制备及其应用研究进展

1.1人源化抗体的构建

1.2人源化抗体的表达

1.3人源化抗体的临床应用

1.4展望

第二章马立克氏病肿瘤相关表面抗原的研究进展

2.1 MATSA的分布与表达

2.2 MATSA的分离和纯化

2.3 MATSA的理化特性

2.4 MATSA抗体

2.5展望

试验研究　第三章MATSA免疫小鼠试验

3.1材料

3.2试验方法

3.3结果

3.4讨论

3.5小结

第四章抗MATSA单克隆抗体的制备及鉴定

4.1试验材料

4.2试验验方法

4.3结果

4.4讨论

4.5小结

结 论

参考文献

致 谢

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