不同日龄仔猪肠道中TWEAK/Fn14表达规律研究

摘要

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)通过与其受体成纤维母细胞因子诱导基因14(Fn14)结合在维持胃肠道免疫平衡及介导机体肠道炎症反应中发挥着重要作用。多种病因引起的仔猪腹泻主要以肠道炎症病变为特征，然而对仔猪胃肠道中TWEAK/Fn14分布表达规律及其在肠道局部免疫调控中生物学功能了解甚少。本研究旨在检测不同日龄健康及LPS刺激仔猪肠道内TWEAK及Fn14分布及表达水平，为探索TWEAK-Fn14通路在仔猪正常生理条件下的免疫动态稳态维持及炎症状态下免疫功能转换中调控作用奠定基础。本实验分别采集0d、7d、33d、55 d健康以及LPS刺激仔猪的小肠、回肠、直肠、结肠组织，通过qRT-PCR及Western Blot方法检测TWEAK、Fn14以及肠道紧密连接蛋白Occludin的分布表达规律。获得的研究结果如下:
　　1.荧光定量RT-PCR结果显示，不同日龄健康仔猪各肠道中均可检测到TWEAK与Fn14 mRNA，其中TWEAK mRNA表达水平在7d时迅速增强并保持高水平，Fn14mRNA表达水平在7～55 d健康仔猪各肠道中表达水平均较0d略微增强;55d仔猪经LPS刺激后，与同日龄正常对照组比较，各肠道中TWEAK mRNA表达量均显著降低，而Fn14 mRNA表达量均显著增强。
　　2.通过Western Blot检测发现，健康仔猪中TWEAK表达水平在0d各肠道组织中均较低，在7～55 d时小肠、回肠和结肠中表达水平迅速增强并维持高水平，直肠组织中7d时表达水平最高，随后快速减低。各检测日龄段健康仔猪各肠道中Fn14表达水平均较微弱，其中0d时表达量最低。另外，小肠中Occludin表达量在0～7 d时最低，随后不断升高，到55 d时达到最高水平;回肠组织中Occludin表达水平在各日龄段均较高。在结肠、直肠组织中，Occludin在0d表达水平最高，随后均呈现下降趋势。经LPS作用处理后，TWEAK与Occludin表达量均较正常对照组显著降低，而Fn14表达量则显著升高。
　　综上所述，本研究初步检测了不同日龄健康仔猪肠道内TWEAK，Fn14与Occludin表达规律以及LPS对其表达的影响。LPS作用仔猪肠道内TWEAK、Fn14及Occludin表达变化提示TWEAK-Fn14通路在仔猪肠道炎症变化中可能发挥重要的调节作用。

目录

声明

摘要

第一章 仔猪腹泻病免疫学研究及TWEAK／Fn14通路研究进展

1．1 仔猪腹泻病免疫学研究

1．1．1 仔猪胃肠道生理特征

1．1．2 仔猪腹泻的发病原因

1．2 TWEAK／Fn14通路

1．2．1 TWEAK的表达

1．2．2 Fn14的表达

1．2．3 TWEAK／Fn14信号通路

1．3 本研究的目的与意义

第二章 不同日龄仔猪肠道中TWEAK／Fn14表达规律研究

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要溶液的配制

2．1．4 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 试验动物的处理

2．2．2 肠道组织的采集

2．2．3 qRT-PCR检测不同日龄仔猪肠道中TWEAK和Fn14蛋白的表达

2．2．4 Western Blot检测不同日龄仔猪肠道中TWEAK／Fn14蛋白的表达

2．3 结果

2．3．1 荧光定量PCR检测方法的建立

2．3．2 qRT-PCR检测不同日龄仔猪肠道组织中TWEAK及Fn14 mRNA表达变化

2．3．3 Western Blot检测不同日龄仔猪肠道组织中TWEAK及Fn14表达变化

2．3．4 Western Blot检测不同日龄仔猪肠道组织中Occludin表达变化

2．4 分析与讨论

结论

参考文献

致谢

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