透骨草杀虫成分提取方法及分离研究

摘要

透骨草(Phryma lepwstachya L.)是透骨草科透骨草属的多年生草本植物，在东亚一直作为传统的杀虫植物来使用。为了进一步的研究和开发这一杀虫植物，本论文以透骨草为研究对象，研究了其杀虫活性成分在植株不同部位的分布情况，探讨了其提取工艺，对杀虫活性较高的部分进行了分离纯化并建立了快速分离高活性成分Haedoxan A的方法，并对分离得到的化合物进行了杀虫活性评价。主要研究结果如下:
　　1.针对透骨草植株的不同部位（根和茎叶），采用不同提取方法（冷浸法和超声法）以及不同溶剂（石油醚、乙酸乙酯、甲醇）进行提取。结果表明:透骨草杀虫活性成分主要分布在根中，而且处于中等偏小极性段中，乙酸乙酯部分最多。
　　2.在活性追踪指导下，使用不同的常见色谱分离手段（萃取、硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱）和重结晶等方法对活性高的部分进行分离纯化，根据所得化合物的理化性质和波谱数据（质谱、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC、COSY等），对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。一共分离鉴定了6个单体化合物，分别是透骨草灵Ⅰ、透骨草灵Ⅱ、双氧木脂素A、双氧木脂素E、豆甾醇、β-谷甾醇。
　　3.建立了快速获取高杀虫活性成分双氧木脂素A的方法。将透骨草根用甲醇超声提取后用乙酸乙酯萃取，用石油醚∶乙酸乙酯=100∶0-0∶100进行硅胶柱层析，利用TLC紫外显色合并相似流分，用粘虫追踪活性最高段组分，用石油醚∶丙酮=3∶1进行硅胶柱层析，用粘虫（Mythimna separata）活性追踪合并活性流分，用甲醇重结晶可直接得到双氧木脂素A。
　　4.对分离得到的化合物进行了杀虫活性评价。分离得到的化合物主要对鳞翅目的昆虫具有较高活性且主要表现为胃毒活性，而对苹果黄蚜(Aphis ciricola van der Goot)、温室白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）和酢浆草如叶螨（Tetranychina harti.Ewing）均无活性。其中透骨草灵Ⅰ对粘虫（Mythimna separata）仅表现麻醉活性，对3龄粘虫4h时的麻醉中浓度NC50为3450μg/mL，而对小菜蛾（Plutella xylostella）有毒杀活性，48h胃毒致死中浓度为1432μg/mL。双氧木脂素A对3龄粘虫胃毒活性致死中浓度LC50为17.06μg/mL，对3龄粘虫24 h触杀LC50为1123μg/mL，对3龄小菜蛾幼虫48 h的致死中浓度LC50分别为857μg/mL。双氧木脂素E对3龄粘虫胃毒活性致死中浓度LC50为60.51μg/mL，对3龄粘虫24 h触杀LC50为3758μg/mL，对3龄小菜蛾幼虫48 h的致死中浓度LC50为1855μg/mL。化合物T6对3龄粘虫8h时的麻醉中浓度NC50为2807μg/mL，对3龄小菜蛾幼虫无活性。

目录

论文说明

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 植物源农药

1．1．1 植物源农药概述

1．1．2 植物源农药的特点

1．1．3 植物源农药开发的意义

1．2 透骨草概述

1．2．1 透骨草简介

1．2．2 透骨草化学成分

1．2．3 透骨草的生物活性

1．3 立题依据及研究内容

1．3．1 立题依据

1．3．2 研究内容

第二章 透骨草杀虫活性成分分布及其提取方法的研究

2．1 材料

2．1．1 供试植物

2．1．2 供试试虫

2．1．3 仪器

2．1．4 试剂

2．2 方法

2．2．1 提取方法

2．2．2 活性测定

2．2．3 数据处理

2．3 结果与分析

2．3．1 透骨草不同部位活性评价

2．3．2 不同溶剂及提取方法对提取率的影响

2．3．3 不同提取物的杀虫活性

2．3．4 甲醇粗提物萃取物的提取率及杀虫活性

2．4 小结与讨论

第三章 透骨草化学成分分离与结构鉴定

3．1 材料

3．1．4 试剂

3．2 方法

3．2．1 提取

3．2．2 分离

3．2．3 活性追踪

3．3 结构鉴定

3．3．2 化合物T2—透骨草灵Ⅱ

3．3．3 化合物T3—双氧木脂素A

3．3．4 化合物T4—双氧木脂素E

3．3．5 化合物T5—豆甾醇

3．3．6 化合物T6(待鉴定)

3．3．7 化合物T7—β-谷甾醇

3．4 小结与讨论

第四章 透骨草分离化合物杀虫活性研究

4．1 材料

4．1．1 供试化合物

4．1．2 供试试虫

4．1．3 仪器

4．1．4 试剂

4．2 方法

4．2．1 生物测定

4．2．2 数据处理

4．3 结果与分析

4．3．1 对粘虫活性

4．3．2 对小菜蛾活性

4．3．3 对其它试虫的活性

4．4 小结与讨论

第五章 结论

参考文献

附录

致谢

作者简介