BtA-miR-202靶向SEPT7调控牛核移植胚胎第一次卵裂的研究

摘要

MicroRNA在胚胎合子基因转换、胚胎致密化、DNA甲基化和染色质重塑等方面发挥重要作用;精子中的microRNA可通过调控早期胚胎转录水平，直接参于胚胎的发育，并在跨代遗传中发挥重要作用。相比体外受精胚胎，体细胞核移植胚胎表现出较低的发育潜能。目前多认为这是技术层面不足和异常重编程导致的，而精子携带进入卵母细胞的RNA的作用一直被忽视。本试验以精源性microRNA为切入点，研究了其对早期核移植胚胎发育的影响。主要研究结果如下:
　　Bta-miR-202在精子中高表达，并且在受精胚胎原核时期的表达水平高于卵母细胞以及2细胞时期的受精胚胎。
　　本课题组前期研究证明SEPT7是bta-miR-202的一个靶基因，生物信息学方法分析显示SEPT7在细胞胞质分裂中发挥重要作用;对SEPT7进行蛋白互作分析，结果提示SEPT7可能与HDAC6相互作用。SEPT7蛋白在类原核期核移植胚胎的表达水平高于原核期体外受精胚;获得bta-miR-202核移植胚胎的SEPT7表达水平低于对照组，但仍高于体外受精组;获得bta-miR-202核移植胚胎的α-tubulin乙酰化水平高于对照组，但仍低于体外受精组;获得bta-miR-202核移植胚胎第一次卵裂发生碎片率低于对照组，但仍高于体外受精组。Bta-miR-202靶向卵源SEPT7，可能通过SEPT7与HDAC6的互作，调控a-tubulin乙酰化水平从而影响核移植胚胎的第一次卵裂。
　　综上所述，bta-miR-202靶向SEPT7调控牛核移植胚胎第一次卵裂。

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论文说明

摘要

第一章 microRNA的研究进展

1．1 microRNA的特征

1．2 microRNA的作用机制

1．3 调控microRNA的机制

1．4 microRNA对生殖细胞的调控

1．5 microRNA对早期胚胎发育的调控

1．6 精子microRNA的研究进展

第二章 体细胞核移植的研究进展

2．1 体细胞核移植

2．2 影响核移植效率的因素

2．3 核移植与细胞骨架蛋白重塑

2．4 胚胎第一次卵裂与发育潜能

第三章 Bta-miR-202在配子和胚胎中的差异表达

3．1 试验材料与方法

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验方法

3．2 试验结果

3．2．2 Bta-miR-202在成纤维细胞、卵母细胞和精子中的表达

3．2．3 Bta-miR-202在体外受精胚胎和核移植胚胎中的表达

3．3 讨论

3．4 结论

第四章 Bta-miR-202靶向SEPT7调控核移植胚胎第一次卵裂

4．1 试验材料与方法

4．1．2 试验方法

4．2 试验结果

4．2．1 SEPT7蛋白序列分析

4．2．2 SEPT7互作蛋白分析

4．2．3 SEPT7在卵母细胞、体外受精胚胎和核移植胚胎中的表达

4．2．5 获得bta-miR-202核移植胚胎的第—次卵裂时间分析

4．2．6 获得bta-miR-202核移植胚胎的第一次卵裂碎片化分析

4．3 讨论

4．4 结论

全文结论

参考文献

附录

致谢

作者简历