脐带血巨核系祖细胞注射液有效性临床试验研究

摘要

一、研究背景
　　近年来,我国血源短缺的问题日益严重,当前我国献血量仅为0.84％,远远低于世界高收入国家的4.54%和中等收入国家的1.01%,并且临床用血需求以每年10-15%的速度快速增长,而采血量的增幅,以北京、天津为例,仅为2.9%和6.5%。血液供与求之间巨大的差距,造成我国多个城市用血极度紧张,从而大大影响急重症患者的临床治疗。在军事医学方面,血液保障也占有举足轻重的作用。现代战争是在核武器威胁下的以高技术兵器为主的战争,核武器、化学或者生物武器损伤成为战斗减员的重要因素之一。其中核化生武器所造成的骨髓损伤抑制及其并发的血小板减少和贫血危害巨大。因此,亟待寻找一种合适有效的“人工血液”替代一部分临床用血,不仅可以缓解临床输血的压力,而且对战时血液保障提供了技术支持与储备,具有重要的社会价值与战略意义。
　　众所周知,造血干细胞具有自我更新与多向分化潜能的优势,已成功地应用于恶性肿瘤、各种血液性疾病等的支持治疗和免疫治疗。我室前期的研究结果表明,脐带血含有丰富的造血干/祖细胞,其增殖能力强,分裂期细胞多,在适宜的扩增时间及合理的细胞因子组合下,可以在扩增造血细胞的同时定向诱导其分化,产生大量功能细胞,如巨核系祖细胞、红系祖细胞、粒系细胞等,以及分化终末期的血小板、红细胞、树突状细胞、NK细胞等。根据上述研究基础,我室研发出两种新的脐带血造血细胞产品---“脐带血红系祖细胞注射液”和“脐带血巨核系祖细胞注射液”,均获得国家食品药品监督管理局(SFDA)临床试验批文。如果通过这两种细胞产品的临床试验,证实其安全性及有效性,并获得临床使用许可,这将是输血治疗以及造血支持治疗中的一次重要的技术突破。
　　那么选择什么样的疾病作为临床试验的适应症来证实我们研发的细胞产品的生物安全性与治疗有效性呢?恶性肿瘤是严重威胁人们生命健康的一类重大疾病。放化疗是恶性肿瘤的主要治疗方法,然而却可导致严重的造血损伤,从而引起红细胞、白细胞、血小板的产生减少、破坏加重,表现为贫血、出血、感染等,严重者可致死亡。特别是恶性血液病患者,不仅普通的放化疗可以导致造血损伤,而且造血干细胞移植(HSCT)的预处理治疗、移植物抗宿主病(GVHD)将进一步加重造血损伤。目前临床上已用重组的红细胞生成素(EPO)、粒/单细胞集落刺激因子(G-CSF/GM-CSF)来改善由于化疗引发的贫血和粒细胞减少,然而目前还没有一种能够有效改善放化疗后血细胞减少的药物。另一种最常用的治疗方式是输注血小板与红细胞,这种治疗方式对于防止患者自发性出血以及改善患者贫血症状,保证抗癌药物、化疗药物按规定的疗程用完起到重要的辅助治疗作用。据统计,美国每年为缓解化疗后引起的血细胞减少消耗的血液量约200万单位,中国每年用血量超过1500万单位。然而,血液供应的缺口严重影响这些患者的治疗。此外,反复输注血小板面临血小板输注无效,反复输注红细胞可致含铁血黄素沉着,引起继发性血色病,导致肝硬化、心力衰竭、糖尿病、性腺功能障碍等一系列输血并发症,同时也不可避免地增加了血源性感染及输血反应发生的概率。
　　面对上述恶性肿瘤放化疗后血细胞减少症的治疗现状,我们根据脐带血来源的血细胞产品制备周期、保存时效等特点,通过与多家临床单位的反复咨询沟通,选择了这种定期或择机择时进行输血治疗的内科系统疾病例如恶性肿瘤放化疗后的造血损伤作为我们细胞产品适合应用的疾病类型,并以恶性肿瘤尤其是恶性血液病放化疗后的造血损伤为适应症开展临床试验研究,如果能解决这部分患者血液来源以及治疗效果的问题,那么将具有重要的社会价值与经济效益。
　　二、研究目的
　　本研究针对前期已获SFDA临床试验批文的“巨核系祖细胞注射液”,选择可以定期或择机择时进行输血治疗的恶性肿瘤尤其是恶性血液病放化疗后造血损伤为适应症,并依据适应症的特点对细胞产品的制备技术与质控标准等进行相应修改、补充、调整及完善,随后开展临床试验研究,证实细胞产品的生物安全性及治疗有效性,继而获得国家相关主管部门的临床使用许可,为临床成分输血和战时血液保障提供新的血细胞来源。同时,由于这两项脐带血造血细胞产品是严格遵守《中华人民共和国药品管理法》及参考国际相关标准研发的新型治疗性干/祖细胞产品,在临床试验过程中将严格按照临床试验批件、国家卫生部《医疗技术临床应用管理办法》以及参照国际干细胞研究学会《干细胞临床转化指南》等相关标准进行研究,为干细胞从基础研究到临床应用的转化探索出一条规范之路。
　　三、主要研究内容与方法
　　1.根据“脐带血巨核系祖细胞注射液”Ⅰ期安全性临床试验研究结果,修改并完善细胞产品的标准化制备操作规程、质量控制操作规程、运输与保存操作规程、临床输注标准化操作规程。
　　2.建立并制定“脐带血巨核系祖细胞注射液”有效性临床试验研究方案,建立并制定标准化临床有效性指标检测操作规程。
　　3.整理“脐带血巨核系祖细胞注射液治疗肿瘤放化疗后血小板减少临床试验研究”相关材料,申报总后勤部卫生部临床新技术批文,并开展有效性临床试验研究。
　　4.建立并制定“脐带血巨核系祖细胞注射液”的有效性临床试验标准化研究方案,确保临床试验数据的标准、真实、可控及科学。
　　5.完成临床试验研究的细胞产品的制备、质控及指标检测,并收集、整理、分析临床有效性试验数据。
　　四、实验结果
　　1.通过整理与分析脐带血巨核系祖细胞Ⅰ期临床试验的细胞产品的制备、质控数据及临床生物安全性试验数据,修改与完善了细胞产品的标准化制备操作规程、质量控制操作规程、运输与保存操作规程、临床输注标准化操作规程、原始试验记录(样表)等文件。
　　2.整理申报总后勤部卫生部临床新技术“脐带血巨核系祖细胞注射液治疗肿瘤放化疗后血小板减少临床试验研究”有关细胞制备与质量控制部分的材料,并于2011年5月获得批文。
　　3.从2011年10月至2013年04月,共制备“脐带血巨核系祖细胞注射液”45例。经检定,细胞状态良好,细胞扩增率达5-10倍,细胞存活率均为90%以上,巨核系祖细胞特异性表面标志CD41的表达率为40-60%,细菌及真菌检测、支原体检测、内毒素检测等均为阴性,45例细胞产品全部符合质量控制标准。
　　4.从2011年10月至2013年04月,共制备“脐带血巨核系祖细胞注射液”45例,均顺利完成临床输注。在可评价有效性的病例中,初步证实可明显升高患者血小板数量。

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论文主要缩略词表

中文摘要

英文摘要

第一部分 脐带血巨核系祖细胞注射液有效性临床试验

引 言

第一节 临床级脐带血巨核系祖细胞注射液的制备技术

第二节 临床级脐带血巨核系祖细胞注射液产品的质量检测

第三节 巨核系祖细胞注射液临床输注及有效性分析

讨 论

结 论

参考文献

第二部分 人造血转录因子GATA-1的功能初探

引 言

第一节 pBpLV-GATA-1真核表达载体的构建与表达

第二节 人造血转录因子GATA-1的功能初探

讨 论

结 论

参考文献

附 录

文献综述

学习期间发表的论文

个人简历

致谢