苏云金芽孢杆菌NU-1、NU-2毒力提高与保护的研究

摘要

该实验研究了苏云金杆菌NU-1、NU-2毒力的提高与保护.研究了NU-1、NU-2的菌种培养、种子培养,筛选了适宜的培养条件;出于工业化生产的目的,利用正交方法优化筛选了发酵培养基,并测定了晶体蛋白含量.结论为:菌种培养72 h,采用1号种子培养基,4％接种量,种子培养7h,NU-1在2号、10号发酵培养基上,NU-2在4号发酵培养基上发酵结果最高.NU-1在2号培养基上发酵40h,菌数达85.5×10<'8>个/ml,pH8.2,晶体蛋白含量为6.320mg/ml,在10号培养基上的生长情况与其相似;NU-2在4号培养基上发酵42h,菌数达到78.0×10<'8>个/ml,pH8.1,晶体蛋白含量为6.085mg/ml.为了进一步研究NU-1、NU-2的生长情况,还测定了其生长和pH曲线.筛选出两种添加剂,试验了它们对Bt发酵的影响.结果表明:添加剂1号和添加剂2号都能提高Bt的发酵菌数并缩短发酵时间.采用不同防腐剂处理Bt制剂,研究了防腐剂的防腐效果.试验结果表明防腐剂1号,2号都是良好的防腐剂,防腐剂1号用量0.15%,防腐剂2号用量0.04%就可取得理想的防腐效果.用SDS-PAGE、酶活测定、电镜观察等方法研究了紫外线照射对Bt的破坏,并初步探寻了保护方法.结果表明:紫外线照射能破坏晶体蛋白的表面结构和形态,照射24h后,酶活性几乎全部丧失,SDS-PAGE显示晶体蛋白几乎完全不溶.添加0.5%苋菜红做保护剂,再经紫外线照射后,酶活降低较小,电泳显示伴孢晶体碱溶产生的135KD和65KD原毒素蛋白几乎无变化,证明染料类是较好的保护剂.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明

第一部分前言

1研究历史

1.1起步阶段（1901-1952年）

1.2认识本质和实用化阶段（1953—1976年）

1.3开拓视野及全面发展阶段（1977—）

2 Bt的基础性研究进展

2.1作用机制和特点

2.2 Bt的分类研究

2.3杀虫晶体蛋白的多态性及其抗虫谱

2.4杀虫晶体蛋白的辅助蛋白

2.5杀虫晶体蛋白基因类型

2.6杀虫晶体蛋白基因在Bt中的分布

2.7 Bt质粒的多态性

2.8 Bt核基因的多样性和保守型

3 Bt的应用性研究进展

3.1 Bt遗传工程菌研究进展

3.2转Bt毒蛋白基因抗虫植物的研究

4 Bt发酵研究

4.1 Bt菌株的优选

4.2 Bt发酵培养基的筛选

4.3 Bt发酵过程的调控技术

4.4高密度培养技术

5增效途径研究

5.1 Bt与化学杀虫剂或其它生物杀虫剂的混用

5.2保护Bt杀虫剂免受紫外光损伤

5.3化学添加剂对Bt的增效作用

6 Bt研究展望

第二部分：实验内容

1菌种

2培养基

2.1斜面培养基

2.2种子培养基

2.3发酵培养基

3所用主要试剂

4仪器与设备

5实验方法

5.1菌种形态观察

5.2培养

5.3发酵培养进行正交实验

5.4晶体蛋白浓度测定

5.5添加剂效果测定

5.6防腐剂效果测定

5.7紫外线照射研究

第三部分结果及讨论

1菌种形态观察

2培养结果

2.1菌种培养结果

2.2种子培养结果

3发酵培养及正交实验

3.1 NU-1试验及其结果

3.2 NU-2试验及其结果

4晶体蛋白浓度测定

4.1晶体量与光密度值的关系

4.2晶体蛋白含量测定

5添加剂试验

6防腐剂效果测定

6.1防腐剂对Bt制剂芽孢萌发的影响

6.2防腐剂处理对Bt制剂菌落数的影响

7紫外线照射研究

7.1酶活性的变化

7.2紫外线对伴孢晶体的损伤

7.3染料类的保护作用

结论

参考文献

附录

致谢