磁性微粒分离纯化糖蛋白方法的建立及应用

摘要

目的：建立环氧基修饰的磁性微粒(简称“环氧磁粒”)为载体固定凝聚素的方法，利用该方法对多种生物学样品进行糖蛋白的分离纯化，并进行蛋白质组学的初步研究。 方法：以环氧磁粒为载体固定小扁豆凝集素LCA及麦胚凝集素WGA，对二者固定化及分离提取糖蛋白的条件进行优化。研究a-甲基甘露糖苷及二价金属离子对于偶联反应的影响。对以健康人肝脏细胞Chang Liver总蛋白、肝癌细胞SMMC-7721总蛋白及健康人血清为样品，分离提取三种生物学样品中的糖蛋白。并对Chang Liver细胞糖蛋白及SMMC-7721细胞糖蛋白进行双向电泳，通过2DImageMaster分析软件对双向电泳凝胶进行背景消减，蛋白点识别及匹配。比较二者之间LCA结合糖蛋白表达的差异。 结论：以环氧基修饰的磁性微粒为固定化载体可实现多种凝集素的固定化修饰。在不同的条件下可实现不同凝集素的高效偶联。利用环氧磁粒固定化凝集素分离纯化复杂样品中的糖蛋白，可应用于蛋白质组学研究。结合双向电泳技术首次建立了健康人肝脏细胞Chang Liver和肝癌细胞SMMS.7721 LCA结合糖蛋白的差异表达谱。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

前言

1.本课题的研究目的和意义

2.本课题的主要研究内容

2.1 磁性微粒分离纯化LCA结合糖蛋白方法的建立

2.2肝脏疾病相关蛋白的研究分析

2.3 磁性微粒分离纯化唾液酸化糖蛋白方法的建立

3.本课题的主要技术路线

第一部分文献回顾

1.磁性微粒研究现状

1.1磁性复合微粒的概念及组成

1.2磁性复合微粒的应用

2.糖蛋白分离纯化技术

3.凝集素固定化技术及其分离纯化糖蛋白的研究现状

3.1凝集素概述

4.凝集素用于糖蛋白分离纯化的固定化策略

4.1非共价结合技术

4.2共价结合技术

4.3凝集素亲和层析的应用

5.凝集素磁性微粒分离纯化糖蛋白技术及其研究现状

5.1 凝集素磁性微粒分离纯化糖蛋白技术原理

5.2凝集素磁性微粒分离纯化糖蛋白技术优势

5.3凝集素磁粒分离纯化糖蛋白技术发展前景

第二部分研究内容

第一章环氧磁粒分离LCA结合糖蛋白方法的建立

1.引言

2.实验材料和方法

3.结果与讨论

4.本章小结

第二章LCA磁粒分离提取糖蛋白技术在肝脏疾病蛋白质组学中的应用

1.引言

2.实验材料和方法

3.结果与讨论

4.本章小结

第三章环氧磁粒分离纯化唾液酸化糖蛋白方法的建立

1.引言

2.实验材料和方法

3.实验结果与讨论

4.本章小结

全文小结

1.论文工作的主要内容和研究成果

1.1 磁性微粒分离纯化LCA糖蛋白方法的建立

1.2 LCA结合糖蛋白的蛋白质组学初步研究

1.3 磁性微粒分离纯化唾液酸化糖蛋白方法的建立

2.进一步工作需要解决的问题

2.1 LCA结合糖蛋白蛋白质组学研究

2.2 磁粒分离纯化唾液酸化糖蛋白条件的优化及其糖蛋白组学研究

参考文献

攻读硕士期间的研究成果及发表的论文

致谢