高效亲和色谱法对四种中药活性成分与人血清白蛋白相互作用的研究

摘要

药物-血清白蛋白的结合作用不仅直接影响着药物在生物体内的转运、分布、药效、药物代谢以及毒副作用等方面的性质，而且还是产生多组份药物之间相互作用的根源所在。因此，开展药物与蛋白结合规律的研究具有重要的意义。本文利用亲和色谱，在模拟人体生理环境下(37℃、pH7.4的缓冲溶液)，采用前沿分析法和竞争置换法对丹皮酚、阿魏酸、绿原酸及香草酸在人血清白蛋白(HSA)上的结合域进行了研究。
　　 ⑴以硅胶为基质，通过羰基二咪唑活化氨丙基硅胶，在温和的条件下将人血清白蛋白(HSA)共价键合于硅胶上，并对两对手性对映体进行了分离，效果良好，说明HSA成功键合于硅胶上。
　　 ⑵通过采用前沿分析法测定丹皮酚、阿魏酸、绿原酸和香草酸在HSA柱上的吸附量，应用单、双位点模型以及单位点中的双倒数模型对实验结果进行了拟合及数理分析。结果表明，丹皮酚、阿魏酸、香草酸在HSA固定相上的吸附符合单位点模型，而绿原酸则符合双位点的吸附模型，初步说明了丹皮酚、阿魏酸、香草酸与固定化HSA相互作用时只存在一类结合位点，而绿原酸的结合位点不止一类。
　　 ⑶采用竞争置换分析，通过考察丹皮酚、阿魏酸、绿原酸和香草酸与HSA上四个药物结合位点的特征标记物华法林、L-色氨酸、毛地黄毒苷和克罗米芬是否存在竞争性作用，确定了这四种药物在HSA上的结合域。结果表明，四种药物均与HSA上的吲哚位点(siteⅡ)上的特征标记物L-色氨酸产生竞争作用，说明丹皮酚、阿魏酸、绿原酸和香草酸在HSA上的结合位点为吲哚位点。同时，还发现当以绿原酸和香草酸作为竞争剂，毛地黄毒苷作为进样溶质时，毛地黄毒苷的保留因子与竞争剂浓度之间呈现负相关性，经实验证明此现象并非为绿原酸、香草酸与毛地黄毒苷之间存在变构效应，具体的原因还有待于进一步的研究。

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第一章绪论

1.1药物与人血清白蛋白相互作用的意义

1.2药物-HSA相互作用的研究现状

1.2.1 人血清白蛋白

1.2.2研究思路

1.2.3研究手段

1.3药物-HSA相互作用的亲和色谱研究

1.4研究对象

1.4.1 丹皮酚

1.4.2阿魏酸

1.4.3绿原酸

1.4.4香草酸

1.5研究内容

参考文献

第二章前沿色谱法对四种小分子药物与HSA相互作用的研究

2.1 前言

2.2实验部分

2.2.1 仪器

2.2.2试剂

2.2.3 HSA固定相的制备

2.2.4前沿分析法测定药物在HSA柱上的吸附量

2.3结果与讨论

2.3.1 前沿分析法研究丹皮酚与HSA的结合作用

2.3.2前沿分析法研究阿魏酸与HSA的结合作用

2.3.3前沿分析法研究绿原酸与HSA的结合作用

2.3.4前沿分析法研究香草酸与HSA的结合作用

2.4结论

参考文献

第三章竞争置换分析法对四种小分子药物与HSA的结合位点的测定

3.1 引言

3.2实验部分

3.2.1 仪器

3.2.2试剂

3.2.3竞争置换分析研究四种中药小分子在HSA柱上的自我竞争作用

3.2.4 四种药物在HSA上蛋白结合域的确定

3.3结果与讨论

3.3.1 自我竞争分析

3.3.2 四种药物在HSA上结合域的确定

3.3.3分子对接模拟丹皮酚、阿魏酸与HSA的相互作用

3.4结论

参考文献

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢