睫状体-虹膜-房水免疫应答途径与角膜移植免疫排斥反应机理的研究

摘要

目的:研究睫状体-虹膜-房水免疫应答途径在角膜移植免疫中的作用，进一步揭示角膜免疫排斥反应的发生机理。 方法:建立两组BALB/C小鼠穿透性角膜移植动物模型，A组为同种异体移植组，供体角膜植片来自C57BL/c小鼠；B组为同种系移植组，供体角膜植片来自BALB/C小鼠。术后定期观察角膜植片情况，并进行免疫学和组织学检查。(1)CD4+T淋巴细胞检测：应用免疫组织化学的方法，检测角膜移植术后不同时间CD4+T淋巴细胞在角巩膜缘、睫状体-虹膜、前房和角膜植片中的浸润情况，判断其迁移路径；(2)虹膜-睫状体新生血管和淋巴管的检测：分别取正常小鼠以及角膜移植术后3、7和14天小鼠，制作虹膜-睫状体组织铺片，应用CD31和LYVE-1单克隆抗体(IgG)进行免疫荧光染色，观察虹膜-睫状体中新生血管和淋巴管在角膜移植手术前后的变化；(3)角膜和虹膜-睫状体细胞因子分析：应用RT-PCR的方法，检测角膜移植术后不同时间角膜植片和虹膜-睫状体组织内CD80、CD86、IFNγ、IL-2、IL-4和IL-10的表达；(4)角膜植片和虹膜-睫状体超微结构检查：应用透射电子显微镜观察正常小鼠以及同种异体角膜移植术后3、7和14天，小鼠角膜和虹膜-睫状体组织结构的变化，以及炎症细胞的活化和迁移情况。 结果:A组小鼠术后角膜植片逐渐水肿混浊，新生血管长入，于12天～20天内发生免疫排斥反应；B组小鼠角膜植片成活时间超过100天。免疫学和组织学检查发现：(1)A组小鼠术后第3天，角巩膜缘和睫状体基底部开始有少量CD4+T淋巴细胞浸润，7天时CD4+T淋巴细胞到达角膜植床以及虹膜和前房内，10天时在角膜植片中也能发现并逐渐增多，免疫排斥反应发生时达到高峰，此后开始减少；B组小鼠术后早期也有少量CD4+T淋巴细胞浸润，但拆除角膜缝线后浸润细胞迅速消失;(2)正常小鼠虹膜-睫状体中有大量血管，而淋巴管较少；A组小鼠术后虹膜-睫状体组织内淋巴管逐渐增多，植片排斥时达高峰，明显多于术前(F=18.078，P=0.000)，而血管变化不明显(F=0.204，P=0.892)；B组小鼠术后，虹膜-睫状体组织内血管和淋巴管均没有明显变化(淋巴管：F=2.022，P=0.181；血管：F=0.291，P=0.831);(3)细胞因子分析：A组小鼠术后，角膜植片和虹膜-睫状体组织内均检测到CD80和CD86，IL-10仅在排斥的角膜植片中表达，其它细胞因子均为阴性；而B组小鼠未检测到任何因子表达;(4)透射电子显微镜下，小鼠同种异体角膜移植术后，角膜植片、前房和虹膜-睫状体中逐渐出现炎性细胞浸润；虹膜组织明显增厚，血管增多，管腔内大量巨噬细胞向外渗出。 结论:睫状体-虹膜-房水免疫途径是诱导角膜移植术后免疫排斥反应另一重要通路；角膜移植术后，随着免疫排斥反应的发生，虹膜淋巴管逐渐增多，可能参与了前房抗原信息的传导以及活化淋巴细胞的迁移。

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综述:眼前房免疫学特征与角膜移植免疫的研究进展

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