变溶菌素发酵生产及在口腔制品中的应用

摘要

本文利用添加变形链球菌（Streptococcus mutans）的双层平板，从土壤中筛选出一株产溶菌酶能力较高的链霉菌(Streptomyces sp.)G4，通对对它的形态特征，培养特征和生理生化特征进行观察并结合细胞壁成分和16SrDNA序列分析，该菌株鉴定为球孢链霉菌（Streptomyces globisporus）。
　　 对球孢链霉菌G4进行紫外诱变和EMS诱变复合处理，并结合抑菌圈大小定向筛选，得到一株产变溶菌素能力明显提高的菌株定名为球孢链霉菌G4-3，酶活较出发菌株提高了1.1倍，产酶周期缩短了1天，传代5次，仍保留90％酶活。
　　 通过单因子试验和正交试验，得到最适发酵培养基组成为：3％蔗糖，1.25％大豆蛋白胨和0.2％牛肉膏；无机盐的最适浓度为：0.6％NaCl、0.05％K2HPO4、0.1％NaH2PO4和0.01％CaCl2；最适培养条件的优化研究发现，培养时间对菌种产变溶菌素影响最大。研究变溶菌素粗酶液的基本性质得出，变溶菌素的最适作用温度和最适 pH分别是55℃和6.5，在pH4.0～10之间变溶菌素比较稳定性；溶菌活性对离子强度的变化比较敏感。多数金属离子会抑制变溶菌素的活性，其中Fe2+、Cu2+、Zn2+、Pb2+几乎可以使其完全失活；各种螯合剂、碘乙酸、非离子型表面活性剂SDS等对变溶菌素有抑制作用，而离子型表面活性剂TritonX-100，Tween80等对变溶菌素有激活作用；通过比较不同细菌、酵母菌的作用效果，变溶菌素比卵清溶菌酶的溶菌谱广泛，不仅对大部分革兰氏阳性菌有较强的溶解活性，而且对部分革兰氏阴性菌也有作用，特别是对变形链球菌的表现出高活性。
　　 对变溶菌素粗酶液进行纯化，得到两种电泳纯的组分A1和A2，二者的分子量分别是14795和23780，等电点分别是9.3和9.8。
　　 最后，对变溶菌素在牙膏中的应用做了可行性分析和初步试验研究，发现牙膏中所含的离子型表面活性剂、增稠剂及粘合剂对变溶菌素发挥功能有抑制作用，但通过向其中加入非离子表面活性剂可有效的解除这种抑制。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章 绪论

第2章 产变溶菌素球孢链霉菌的筛选及鉴定

第3章 球孢链霉菌的诱变育种

第4章 变溶菌素发酵条件的优化及粗酶液酶学性质研究

第5章 变溶菌素的分离纯化

第6章 变溶菌素在口腔制品中的应用

第7章 总结和展望

参考文献

致 谢

在学期间主要科研成果