MSU纳晶毒性的细胞水平研究与复方美托拉宗缬沙坦的药代动力学研究

摘要

本文第一部分内容研究的是纳米材料的细胞毒性问题。纳米材料安全性问题成为制约纳米技术在生物医药领域应用的巨大壁垒，阐明纳米毒性机制是解决纳米安全应用的关键。然而关于这个问题，国际科学界尚没有明确的答案。虽然纳米材料的尺寸、表面效应是目前纳米毒性机制的主流观点，但是这种学说并不能揭示纳米毒性规律以及对纳米材料应用产生指导意义。新学说“物理损伤是纳米毒性的根源”，剖析纳米毒性的本质，从理论上系统论证了纳米材料与生物系统相互作用的规律。
　　第一部分研究试图通过尿酸盐生物学模型，探讨由尿酸盐引发的痛风是源于尿酸钠分子的化学毒性还是尿酸盐纳米结晶的物理损伤，从而揭示纳米毒性的本质。本实验通过浓度控制形成尿酸钠针状纳晶（25nm和135 nm），然后将尿酸钠针状纳晶和尿酸钠溶液分别作用于RAW264.7和 Hep G2模型，利用MTT法、LDH法、ROS染色以及凋亡坏死实验比较MSU纳晶和溶液对细胞的损伤影响，并用换液和温度控制等方法进行细胞恢复实验加以验证。
　　结果显示，MSU溶液对HepG2细胞和RAW264.7细胞没有存活率、膜通透性、凋亡坏死等方面损伤作用，也不会造成细胞内 ROS水平上升；而 MSU纳晶可降低HepG2细胞和RAW264.7细胞的存活率、影响膜通透性、升高ROS水平、诱导细胞凋亡坏死；并且当MSU纳晶溶解后细胞存活率又有所改善。
　　结果表明MSU纳晶对细胞造成的损伤很大程度与MS U的状态（分子或粒子）有关，这种由粒子实体而非化学本质带来的颗粒模式毒性是一种新的损伤模式-物理损伤，它与生命体系之间的相互作用是属于物理反应范畴而不是化学反应。而物理损伤在某些条件下是可修复的，如实体粒子溶解、降解或消失，但是若粒子最初的物理损伤引发了后续的不可逆的生化反应，其毒性问题将复杂化，不在本部分讨论范围内。
　　本文第二部分内容研究的是制剂的药代动力学以及其生物利用度问题。抗高血压药物的联合应用是一种主流的趋势，因为联合治疗相对于单药治疗具有安全有效降压，减少不利效应，更好的保护靶器官，提高患者的依从性等优点。本课题组首次选用喹唑啉类利尿药美托拉宗和血管紧张素受体拮抗剂类药物缬沙坦作为模型药物，制备了MV单片复方制剂。
　　为对其进行评价本部分内容首先利用HP LC-MS/MS建立了同时测定比格犬血浆中美托拉宗和缬沙坦浓度的方法，对其进行验证后应用于非临床药代动力学及生物利用度研究。
　　结果显示，美托拉宗、缬沙坦的线性范围分别为0.5～100 ng/ml及5～5000 ng/ml，相关系数 R2分别为0.9937和0.9939，批内精密度分别为2.09％～8.85%和2.36%～13.12%，基质效应分别为87.73%～98.62%和99.03%～137.35%，回收率分别为75.74%～81.82%和83.89%～95.64%。
　　比格犬给予参比制剂后，美托拉宗的Tma x为1.08±0.20 h，C ma x为30.91±3.49 ng/ml，AUC(0-t)为153.53±36.17 ng/ml·h；比格犬给予试验制剂后，美托拉宗的Tmax为1.00±0.56 h，Cmax为28.59±9.47 ng/mL，AUC(0-t)为162.27±72.12 ng/ml·h。参比制剂和试验制剂的Tmax、Cmax和AUC(0-t)没有显著差异。参比制剂给药后美托拉宗的t1/2和MRT(0-t)分别为3.49±0.74 h和4.41±0.91 h；试验制剂给药后美托拉宗的t1/2和MRT(0-t)分别为3.74±0.74 h和5.02±1.35 h，参比制剂和试验制剂的t1/2和MRT(0-t)没有显著差异。
　　比格犬给予参比制剂后，缬沙坦的Tma x为1.17±0.91 h，C ma x为6605.01±1356.79 ng/ml， AUC(0-t)为24490.36±3587.24 ng/ml·h；比格犬给予试验制剂后，缬沙坦的Tmax为1.78±1.05 h，Cmax为6288.97±2802.22 ng/mL，AUC(0-t)为24422.48±4520.86 ng/ml·h。参比制剂和试验制剂的Tmax、Cmax和AUC(0-t)没有显著差异。参比制剂给药后缬沙坦的t1/2和MRT(0-t)分别为2.36±0.69 h和3.86±0.31 h；试验制剂给药后缬沙坦的t1/2和MRT(0-t)分别为2.27±0.14 h和3.94±0.27 h，两个药物参比制剂和试验制剂的t1/2和MRT(0-t)无显著差异。
　　结果表明，所建立的方法特异性好、定量限低、准确度高、精密度好，符合药代动力学实验要求。比格犬口服给药自制制剂复方美托拉宗缬沙坦和参比制剂美托拉宗片和缬沙坦氢氯噻嗪片后，美托拉宗和缬沙坦在体内消除快，拟合的血药浓度-时间曲线均符合无时滞的一级消除一房室模型，说明两个药物的试验制剂和参比制剂均具有速释的特性。两个药物试验制剂和参比制剂t1/2、MRT(0-t)、Cmax、Tmax、AUC(0-t)之间无显著差异，说明两种制剂中的药物具有相似的药代动力学特性。自制制剂相对于市售制剂的美托拉宗平均相对生物利用度（AUC）为108.54±41.54%；缬沙坦平均相对生物利用度（AUC）为101.52±24.32%，说明两个药物的生物利用度与参比制剂相似。

目录

声明

缩略词表一

缩略词表二

第一部分M SU纳晶毒性的细胞水平研究

前言

第一章 MSU纳晶的制备与表征

第二章 细胞水平MSU纳晶的毒性研究

结论与展望

参考文献

第二部分 复方美托拉宗缬沙坦的药代动力学研究

前言

第一章 HP LC-MS/MS同时测定比格犬血浆中美托拉宗和缬沙坦方法的建立

第二章 HP LC-MS/MS同时测定比格犬血浆中美托拉宗和缬沙坦方法的验证

第三章 HP LC-MS/MS同时测定比格犬血浆中美托拉宗和缬沙坦方法在复方制剂非临床药代动力学研究中的应用

结论

参考文献

在校期间发表论文

个人简历

致谢