城市生活污水中志贺氏菌的定量PCR检测研究

摘要

水污染是我国环境面临的严重问题之一,为了缓解由此造成的压力,我国水污染治理工作力度日益加大,水质得到一定改善,但是污水经过处理工艺后仍然有大量的病原微生物,其中有大量的致病菌,严重危害人类健康。志贺氏菌是典型致病菌之一,它通过侵袭人类肠上皮细胞,造成患者腹泻、痉挛性腹痛、发烧等症状,严重危害人类健康。鉴于此,在城市污水处理系统中对这种病原菌进行检测以了解它的存在情况,对于以后改善污水处理工艺去除病原菌的效果以及评价病原菌带来的风险等都具有实际指导意义。
　　本研究选用膜吸附-洗脱法对城市生活污水水样进行样前处理,通过选用一对特异性均较强的引物ipaH8和ipaH10,对浓缩后的志贺氏菌进行PCR检测。通过梯度PCR考察了退火温度对检测结果的影响,选择57℃作为退火温度。在定性检测方法的基础上建立了志贺氏菌的ipaH基因定量PCR检测方法。研究通过结合西安当地生活污水中志贺氏菌的分布情况,解决了ipaH基因在志贺氏菌中多拷贝的问题。此外,本研究通过模拟自然水体,利用建立的ipaH基因定量PCR方法研究水体中志贺氏菌的变化规律。同时,利用该方法分别对西安地区A、B两个不同污水厂的进水和二级出水水质进行了监测,并对志贺氏菌的分布情况进行了简单分析。

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1 绪论

1.1 国内外水资源现状

1.2 城市污水回用面临的病原微生物污染问题

1.3 水体中典型肠道病原菌：志贺氏菌及其危害

1.4 水体中志贺氏菌的传统检测方法及其局限性

1.5 PCR技术原理及其应用

2 城市生活污水中志贺菌定性PCR检测方法的建立

2.1 试验材料

2.2 水样采集

2.3 志贺氏菌PCR检测方法的建立

2.4 PCR结果分析

2.5 小结

3 志贺氏菌ipaH基因定量PCR检测方法的建立

3.1 试验材料

3.2 实时荧光定量PCR标准品的构建

3.3 ipaH基因定量PCR的反应体系和反应条件

3.4 标准曲线的测定及评价

3.5 小结

4 西安地区志贺氏菌ipaH基因的多拷贝分析

4.1 志贺氏菌流行特点

4.2 多角度考察ipaH基因拷贝数

4.3 小结

5 城市污水中志贺氏菌的分布规律

5.1 志贺氏菌的自然影响因素

5.2 城市污水系统对志贺氏菌去除效果的研究

5.3 小结

6 结论与建议

6.1 结论

6.2 建议

致谢

参考文献

附 录