杜仲植物内生真菌EL09次生代谢产物的研究

摘要

药用植物的利用历史悠久，不仅含有多种类型的天然活性成分，而且含有种类丰富的内生真菌，内生真菌可产生结构新颖、具有一定生物活性的化合物。内生真菌是丰富的生物资源，希望以此作为研究对象发现对人类有意义的天然产物。杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)是我国常见的中药材，其树皮经过干燥可入药。本论文对杜仲植物内生真菌EL09的次生代谢产物进行了研究，旨在发掘具有良好抗菌活性的天然产物。
　　 通过对杜仲根、茎、叶组织内生真菌的逐步分离纯化，共分离得到62株内生真菌，属于7目，9科，15属。杜仲内生真菌在种类组成上具有多样性特征，其中以链格孢属为优势种群，占总数的25.81％，其次是青霉属，占总数的16.13％。
　　 采用菌饼法及滤纸片法，对62株杜仲内生真菌菌株及其次生代谢产物进行抗菌活性筛选，筛选出8株具有广谱抗菌活性的内生真菌，其中编号为EL09的菌株抗菌谱广、抗菌效果最显著。选定这一株菌作为本论文的研究对象。
　　 对目标菌株EL09进行了大量发酵，乙酸乙酯萃取后，经过除糖、减压浓缩后得到其发酵粗品。采用柱色谱法结合重结晶等分离纯化方法，通过解析波谱数据并结合理化常数分离并鉴定了6个化合物：麦角甾醇erogosterol(1)，5-羟甲基-3-呋喃甲酸5-hydroxymethylfuran-3-carboxylic acid(2)，fumiquinazoline C(3)，赤藓醇erythritol(4)，D-甘露醇D-mannitol(5)，尿嘧啶uracil(6)。
　　 测定各个化合物对2种细菌和5种植物病原真菌的最小抑菌浓度。抗菌实验结果显示：化合物1对细菌具有明显的抑制活性，化合物2对细菌、真菌都有抑制活性，尤其是对真菌有很强的抑制活性，对芍药炭疽病菌（Colletotirchum gloeosporioides）、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的最小抑菌浓度分别为6.25、12.5、12.5、6.25、25μg/mL，与阳性对照结果基本一致。特别是对黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp. cucumerinum)的MIC低于阳性对照酮康唑的MIC(12.5μg/mL)。化合物2是一种很好的抗真菌剂。