13/17罗伯逊易位猪POU1F1基因的多态性及其与经济性状的相关分析

摘要

POU1F1为POU结构域蛋白家族的成员之一，是动物垂体前叶特异表达的一种具有重要功能的转录因子，它正向调节着哺乳动物生长激素(GH)、催乳素(PRL)、促甲状腺素(TSH-β)的代谢，在调控动物生长发育和繁殖上有重要作用。
　　 试验选取13/17易位杂合子猪×13/17易位杂合子猪、皮杜×13/17易位杂合子猪、约克×13/17易位杂合子猪3种杂交组合的394头后代，采用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本进行核型分析;对POU1F1基因的DNA多态性进行PCR-SSCP和PCR-RFLP检测分析，寻找多态位点与生长、胴体组成等经济性状间可能存在的相关性。研究结果如下:
　　 1、对供试猪群进行核型分析，出现三种核型猪，分为3种核型群:13/17易位纯合子[2n=36，XY或XX，rob(13;17)]31头、13/17易位杂合子[2n=37，XY或XX，rob(13;17)]183头和正常核型猪[2n=38，XY或XX]180头。
　　 2、对3种杂交组合后代应用PCR-RFLP技术进行基因多态性分析，利用PstⅠ、RsaⅠ二种内切酶酶切POU1F1基因的包含部分内含子4、全部外显子5、内含子5、外显子6及部分3'侧翼的1746bp扩增片段，检测到了一个RsaⅠ-RFLP多态位点A，在此位点上有A1、A2两个等位基因，3种基因型(A1A1、A1A2、A2A2)。在3种杂交后代群中A1等位基因和A1A1基因型频率占优势，在3种核型群体中也是A1等位基因和A1A1基因型频率占优势，其中A1A2基因型频率在易位杂合型群体中较高。该多态位点在各杂交后代群中均未达到Hardy-Weinberg平衡，在不同核型群中亦处于非平衡状态。13/17易位杂合子猪×13/17易位杂合子猪和约克×13/17易位杂合子猪两杂交后代群的PIC表现为中度多态，而皮杜×13/17易位杂合子猪杂交后代群表现为低度多态;易位杂合型群体表现为中度多态，正常核型和易位纯合型群体表现低度多态性。
　　 3、应用PCR-SSCP技术，检测POU1F1基因的第4外显子和第5内含子。第4外显子未检测到突变;第5内含子上检测到一个突变位点E，出现E1E1、E1E2两种基因型。在各杂交组合后代群和核型分类群中均为E1等位基因和E1E1基因型频率占优势，E1E2基因型频率在易位纯合型群体中较高。该突变位点在各杂交组合后代群和不同核型分类群中均处于Hardy-Weinberg非平衡状态。
　　 4、结合各杂交组合后代生长和胴体组成的测定记录研究基因型对经济性状的遗传效应，相关性分析出现显著差异。位点A的基因型对早期生长有显著影响(P＜0.05)，位点E基因型对早期生长和眼肌面积有显著影响(P＜0.05)，初步研究揭示POU1F1基因多态性与生长、眼肌面积等存在相关。

目录

摘要

英文缩写词表

第一章 文献综述

引言

1 猪的育种方法

2 猪的育种目标

3 RFLP技术

4 单核苷酸多态性(SNP)

5 PCR-SSCP技术

6 家猪13／17罗伯逊易位

7 猪13、17号染色体上基因和标记的定位现状

8 PDU1F1(Pit-1)基因

第二章 猪群核型分析

1 试验材料和方法

1．1 供试猪群

1．2 试验仪器

1．3 主要试剂及溶液配制

1．4 细胞培养及染色体标本制备

2 结果与分析

第三章 猪POU1F1基因RFLP分析

1 试验材料和方法

1．1 试验材料

1．2 试验方法

2 试验结果与分析

2．1 基因组DNA检测

2．2 PCR反应结果

2．3 酶切分析

2．4 POU1F1基因RFLP多态性与经济性状相关分析

第四章 猪POU1F1基因SSCP分析

1 试验材料和方法

1．1 试验猪群

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂及溶液配制

1．4 试验方法

2 试验结果分析

2．1 PCR反应结果

2．2 猪POU1F1基因第4外显子(159bp)扩增产物的PCR-SSCP分析

2．3 猪POU1F1基因第5内含子(218bp)扩增产物的PCR-SSCP分析

2．4 猪POU1F1基因遗传多态性分析

2．5 猪POU1F1基因SSCP多态性与经济性状相关分析

第五章 讨论

1 核型分析

2 PCR扩增的影响因素

3 PCR-RFLP分析

4 PCR-SSCP分析

5 转录因子的调控和POU1F1基因的转录调节

6 群体POU1F1基因遗传多态性分析

6．1 Rsa I-RFLP分析

6．2 Pst I-RFLP分析

6．3 PCR-SSCP分析

6．4 Hardy-Weinberg平衡检验

6．5 遗传多态性分析

7 POU1F1基因多态性与经济性状相关性分析

7．1 Rsa I-RFLP多态位点与经济性状相关性

7．2 SSCP多态位点与经济性状相关性

7．3 POU1F1基因与其他侯选基因的连锁

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文

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